一、实验目的

模拟化妆品生产、储存和消费者使用过程中可能存在的微生物污染（一次污染和二次污染），人为的在产品中加入定量的已知菌种，定期跟踪检测产品中微生物的消长情况，来评判防腐剂的防腐效果的实验，从而保证化妆品中中微生物含量达标。

二、菌种选择

同微生物限度实验。

三、实验方法

方法1一次加菌法

称取一定量的受试样品，按1:x的比例加入混合菌悬液，要求样品中的细菌初始加菌浓度达到105*106 cfu/g；酵母和霉菌初始加菌浓度达到105*106 cfu/g以及不同浓度梯度抑菌剂。将样品与菌液充分混合均匀，用封口胶封好样品瓶口，置于25℃的培养箱中保存。在接菌后的第7、14、21和28天取样检测微生物含量。

方法2 三次加菌法

称取一定量的受试样品，按1：x的比例加入混合菌悬液，要求样品中的细菌初始加菌浓度达到106*107 cfu/g ；酵母和霉菌初始加菌浓度达到105*106 cfu/g 。将样品与菌液充分混合均匀后，用封口胶封好样品瓶口，置于25℃的培养箱中培养。接下来每14天加菌一次一共加3次菌，每次加菌浓度均需达到要求。从初次加菌后的每七天取样做微生物含量检测，即采样分析第7、14、21、28、35、42天中样品的含菌量。其中，第14天检测后进行第二次加菌，第28天检测后进行第三次加菌。

四、评价标准

CTFA标准：美国化妆品、洗涤剂和香精协会（CTFA)推荐的菌种，是具代表性的，按CTFA标准做微生物挑战试验通过，3年保质期。

五、参考标准

到目前为止, 世界各国及其有关组织对化妆品防腐体系的评价还未有一个统一的方法, 但其基本设计则是相同的,其中美国药典( USP)法及美国化妆品、香精和洗涤剂协会( CTFA) 法是较具代表性的两种方法。

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