细胞培养概述

永生化人星形胶质细胞 - fetal - hTERT 是一种重要的细胞模型，在神经系统疾病研究、药物筛选等领域有着广泛应用。成功的细胞培养是开展相关研究的基础，以下是详细的细胞培养操作使用指南。

培养基的配制与选择

• 基础培养基 ：常使用 Prigrow IV 基础培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、10ng/ml 人表皮生长因子（EGF）、1% L - 谷氨酰胺和 1% 青霉素 / 链霉素溶液。也有研究使用 DMEM/F-12（1:1）培养基，添加 10% 未经热灭活的胎牛血清、1% GlutaMAX、100IU/ml 青霉素和 100μg/ml 链霉素。

• 培养条件 ：细胞在 37℃、5% CO?、95% 空气的条件下培养。

细胞的复苏与冻存

• 细胞复苏 ：收到冻存细胞后，检查冻存管是否有解冻破损现象。将冻存管放入 37℃水浴中快速融化，一般 1 分钟左右。然后将细胞悬液转移至离心管，用培养液稀释后低速离心 3-10 分钟，去除上清，加入新鲜培养液后培养。收到培养细胞时，用 75% 酒精喷洒细胞瓶消毒，放置培养箱静置 2-4 小时稳定细胞状态，之后显微镜下观察细胞生长情况并拍照记录。

• 细胞冻存 ：选择状态良好的细胞，消化后制成单细胞悬液，按冻存数量加入含 5% DMSO 的冻存液，轻轻混匀后分装于冻存管，放入 - 80℃冰箱中，24 小时后转入液氮罐保存。

细胞的传代

当细胞密度达到 80% 左右时，即可进行传代。传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加入 0.25%Trypsin-0.53mM EDTA 消化液，放入培养箱消化 1-2 分钟，显微镜下观察细胞，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲培养瓶后，加含 10% 血清的培养基终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，使其全脱落，吸出至离心管，1000rpm 离心 5-8 分钟，弃去上清，补加培养基吹匀。

4. 按 1:2 至 1:4 的比例，将细胞悬液分到新的培养瓶中，加入适量培养基，放入培养箱继续培养。

细胞培养的观察与记录

• 肉眼观察 ：主要观察培养基的颜色变化及细胞生长情况。若培养基颜色变黄、变浑浊等，可能提示细胞状态不佳或受到污染。

• 显微镜观察 ：定期在倒置显微镜下观察细胞的形态、生长状态等。正常的永生化人星形胶质细胞 - fetal - hTERT 呈多极形状，细胞质丰富，核仁明显等。

细胞培养的污染与防治

• 污染种类 ：常见的有细菌、酵母菌、霉菌和病毒等污染。

• 预防方法 ：严格无菌操作技术，如在超净工作台内进行操作、使用无菌器械和试剂等；保持操作环境清洁；使用良好的细胞来源和培养基配制。

• 检测与处理 ：可通过肉眼直接观察法、培养检查法、显微镜观察法、PCR 检测等方法检测污染。一旦发现污染，应及时采取相应的处理措施，如丢弃培养物、使用抗生素等。