一、细胞培养概述

永生化人星形胶质细胞 - SV40 是一种重要的细胞模型，在神经系统疾病研究、药物筛选等领域有着广泛应用。成功的细胞培养是开展相关研究的基础，以下是详细的细胞培养操作使用指南。

二、培养基的配制与选择

• 基础培养基 ：常用的有 DMEM/F12 和 MEM。DMEM/F12 培养基缓冲能力强、营养成分丰富，适合细胞长期培养；MEM 成分相对简单，适用于对培养条件要求基础的细胞。

• 血清添加 ：一般添加 10% 胎牛血清（FBS），其中的生长因子、激素等成分能促进细胞增殖和贴壁。但在一些特殊研究中，也可采用无血清培养基，需根据细胞类型和实验需求进行优化调整。

三、细胞的复苏与冻存

• 细胞复苏 ：从液氮中取出冷冻管，迅速投入 37℃~38℃水浴中融化，约 1 分钟左右，然后在 5 分钟内用培养液稀释至原体积的 10 倍以上，低速离心 3-10 分钟，去除上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。

• 细胞冻存 ：选择对数生长期细胞，胰酶消化后制成细胞悬液，加入冻存管并标记。冻存液配制为含 20% 血清培养基、10% DMSO。冻存程序可采用标准程序、程序降温仪、简易程序或一般程序。

四、细胞的传代

当细胞密度达到铺满整个瓶底的有效基质时，或者当细胞浓度超出培养基的能力时，细胞生长停止或生长速度大大放缓，这时就需要进行传代。传代时，先用胰蛋白酶消化细胞，然后按一定比例将细胞分散到新的培养瓶中进行培养。

五、细胞培养的观察与记录

• 肉眼观察 ：主要观察培养物的颜色及混浊度。若培养液颜色变黄、变浑浊等，可能提示细胞状态不佳或受到污染。

• 显微镜观察 ：定期在倒置显微镜下观察细胞的形态、生长状态等。正常的永生化人星形胶质细胞 - SV40 呈梭形或星形，细胞质丰富，核仁明显等。

六、细胞培养的污染与防治

• 污染种类 ：常见的有细菌、酵母菌、霉菌和病毒等污染。

• 预防方法 ：严格无菌操作技术，如在超净工作台内进行操作、使用无菌器械和试剂等；保持操作环境清洁；使用良好的细胞来源和培养基配制。

• 检测与处理 ：可通过肉眼直接观察法、培养检查法、显微镜观察法、PCR 检测等方法检测污染。一旦发现污染，应及时采取相应的处理措施，如丢弃培养物、使用抗生素等。