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ELISA相关问题(三)

来源:北京索莱宝科技有限公司   2025年08月05日 13:52  

13. Q:变异系数(CV)较大的原因?

A

可能原因参考解决方案
孔中有气泡加样小心,避免读数前产生气泡
孔板洗涤不均/不充分确保每次洗涤达到要求,按建议洗涤
试剂混合不充分确保试剂已充分混合
加样量不一样使用校准好的移液器确保每孔加样量一致
边缘效应试剂盒提前恢复室温,保证所有试剂温度一致
样品制备/保存不一致确保始终如一的样品,避免不同批次/保存条件造成的差异

14. Q:标准曲线较差?

A

可能原因参考解决方案
标准品稀释不当确认是否正确稀释
标准品复溶不当标准品复溶前短暂离心,确保是否充分溶解
标准品降解确认保存方式及存放时间
曲线和标度不适合尝试不同的拟合方式
边缘效应试剂盒提前恢复室温,保证所有试剂温度一致
移液出错使用校准好的移液器和正确的移液方法
标准品有污染小心操作,避免污染
错误的孵育时间或温度按照说明书的流程中操作

15. Q:高背景或阴性对照值偏高

A

可能原因参考解决方案
洗板不充分将洗涤液注入反应孔充分洗涤,充分拍干孔中液体
酶结合物过量检查酶稀释度,按说明书标识的稀释度稀释
底物污染加底物前检查底物是否为透明无色,请勿用变蓝的底物,重新用新的底物试验
阴性对照孔被阳性对照污染注意洗涤时不要把洗液溢出孔外,不使阴阳对照孔液体涟接一起
不同批次试剂混用检查试剂批号,请勿用不同批次试剂
终止后太长时间读数终止后应立即读数

16. Q:显色信号弱

A

可能原因参考解决方案
试剂过期检查试剂盒有效期,请勿用过期试剂
孵育时间过短按说明书中规定的时间孵育
试剂污染检查试剂是否污染,请勿用污染的试剂
酶标仪滤光片不匹配检查酶标仪设置及滤光片是否匹配
试剂盒平衡不充分确保试剂盒试验前平衡至室温
显色时间不够增加底物显色时间

17. Q:无显色信号

A

可能原因参考解决方案
检测抗体、酶、或显色剂漏加检查试验操作流程,重复试验
酶被叠氮钠污染请使用重新配制的试剂
试剂添加顺序有误检查复核试验添加顺序、流程,重复试验
波长不正确核实检测波长

18. Q:标曲佳但样品孔无信号

A

可能原因参考解决方案
样品中靶标物含量低或样品中无靶标物设置阳性对照,重复实验
样品基质效应影响检测重新稀释样品后复测
标曲选择不合适更换拟合方式,选最合适的拟合方式
样本含量低于灵敏度浓缩样本或更换灵敏度更高的试剂盒


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