一、细胞传代

细胞传代培养是指将细胞从一个培养瓶中移植到下一个培养瓶中，继续培养和增殖的过程。传代培养的目的是实现细胞扩增，为后续实验做准备。一般细胞可传代10-50代。

指数生长期是细胞活力best的时期，可对细胞进行各种实验。细胞生长一段时间后会呈现接触抑制。而恶性细胞则无接触抑制现象。癌细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑制。细胞数量达到饱和密度后，细胞与营养液的交换面积减少，代谢产物积累，pH值下降细胞停止增殖，进入停滞期。在此时应及时进行传代，否则因细胞中毒受损，大量细胞出现死亡，至少再传1-2代后，细胞才能恢复。

二、贴壁细胞传代操作步骤

1）将培养基、胰酶及PBS等预先在37℃水浴中加热30分钟；

2）从培养箱中取出细胞，当细胞融合率达到85%以上时即可进行传代；

3）将培养瓶内的旧培养液吸除或倾倒，使用PBS清洗瓶内残留培养基，并倒尽；

4）向瓶内加入适量的0.25%胰蛋白酶溶液，确保其能覆盖培养瓶底部，T25瓶约需1ml，T75瓶约需1-2ml；

5）将培养瓶置于37℃孵箱或室温（25℃）下进行消化，观察细胞状态，待细胞wanquan变圆且轻轻敲打瓶身时有部分细胞脱落为准。一般情况下，细胞消化过程持续1-2分钟即可完成；

6）直接添加适量含血清的培养基以终止消化，T25瓶可加入2ml或以上，T75瓶可加入3ml或以上；

7）使用吸管吸取瓶内培养液，按顺序轻柔地吹打瓶壁，使细胞从瓶壁上脱落；

8）对细胞进行计数，取25μl细胞悬液、65μl PBS与10μl台盼蓝混合均匀后，取10μl置于计数板中，使用显微镜进行计数，以判断细胞浓度；

9）根据细胞浓度进行细胞分瓶培养。一般按照1：2至1：8的比例进行传代，将细胞接种于新的培养瓶中，置于CO2培养箱中培养。具体传代比例需依据细胞量而定，传代过稀会导致细胞生长缓慢，传代过密则可能引起接触抑制或密度抑制等问题，影响细胞生长；

10）细胞贴壁后，更换培养液的时间应根据细胞生长状态和实验需求而定，一般建议在2至3天后更换培养液。

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