铜绿假单胞菌增菌肉汤是一种选择性液体培养基，用于从复杂样本（如临床标本、环境样本或食品）中富集和选择性培养铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。以下是其原理和使用方法的详细说明：

一、原理

1、选择性抑制

培养基中添加溴棕三甲铵或其他抑制剂，可抑制大多数革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌的生长，但对铜绿假单胞菌的抑制作用较弱，从而实现选择性富集。

2、营养支持

含有蛋白胨、甘油等成分，提供铜绿假单胞菌生长所需的碳源、氮源和能量，促进其快速增殖。

3、代谢指示

铜绿假单胞菌代谢过程中会产生绿脓菌素（Pyocyanin）和荧光素（Pyoverdine），使培养基呈现蓝绿色荧光或绿色色素（需紫外灯观察）。

二、使用方法

1、样本处理与接种

样本类型：水样、拭子、组织、食品等。

前处理：

液体样本（如水）可直接接种；固体样本需均质后取悬液。

若样本中菌量低，可先预增菌（如缓冲蛋白胨水）。

接种量：按1:10比例将样本加入肉汤（如10 mL肉汤接种1 mL样本）。

2、培养条件

温度：35–37°C

时间：18–24小时（若菌量低，可延长至48小时）

需氧条件：静置培养或轻微振荡。

3、结果观察

浑浊度：阳性样本肉汤变浑浊。

色素产生：

肉眼可见蓝绿色或黄绿色（绿脓菌素）。

紫外灯下（365 nm）观察荧光（荧光素）。

阴性结果：澄清无变化。

4、确认试验

取培养液划线接种至选择性琼脂，35°C培养18–24小时。

典型菌落特征：扁平、边缘不规则、产生色素或荧光。

进一步生化鉴定（如氧化酶试验、42°C生长试验、分子检测等）。

三、注意事项

1、质量控制

阳性对照：铜绿假单胞菌（ATCC 27853）应生长良好并产色素。

阴性对照：大肠杆菌（ATCC 25922）应被抑制。

2、干扰因素

样本中高浓度抑制剂（如抗生素）可能影响增菌效果。

某些假单胞菌（如荧光假单胞菌）可能产生类似色素，需结合生化鉴定。

3、储存与保质期

未开封干粉培养基常温保存，配制后冷藏（2–8°C）并在1个月内使用。

四、应用场景

临床：检测伤口感染、呼吸道标本中的铜绿假单胞菌。

环境监测：医院用水系统（如水管、呼吸机）的污染检测。

食品工业：评估饮用水或原料的微生物安全性。

通过选择性增菌，该肉汤可显著提高铜绿假单胞菌的检出率，尤其适用于低菌量或含竞争菌群的复杂样本。

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