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【微课堂】生物指示剂培养周期确定依据

来源:浙江泰林生物技术股份有限公司   2025年07月30日 16:18  

 

根据GB/T 18281.1-2024 《医疗保健产品灭菌 生物指示物 第1部分:通则》生物指示剂的培养时间一般为7天。但是在接收成品生物指示剂时,你可能会发现说明书上标示的生物指示剂培养时间是7天、48h、24h,甚至是更短的3h、30min,这些小于要求的培养时间是怎么确定的呢?


缩短生物指示剂培养时间需依据ISO 11138-8:2021Sterilization of health care products — Biological indicators —Part 8: Method for validation of a reduced incubation time for a biological indicator开展实验,根据实验结果确认最短的培养时间。该标准的等同替代国家标准为GB/T 18281.8 - 2024《医疗保健产品灭菌 生物指示物 第8部分:缩短生物指示物培养时间的确认方法》,于2024年11月发布,将于2026年06月正式实施。

For example


以泰林SS6-121型自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂的缩短培养时间测试结果为例我们详细介绍如何确认生物指示剂的缩短培养时间。

01



确认生物指示剂在部分周期灭菌的条件,使生物指示剂在此周期中灭菌,培养7天后预期有30%~95%呈现阳性。

将待测批次生物指示剂在抗力仪中121℃灭菌16min,培养7天后,生物指示剂的阳性率为70%,认为该灭菌时间符合预期要求;假如在相同条件下,生物指示剂培养7天后的阳性率低于30%或高于95%,则认为该灭菌时间不符合预期,需要调整灭菌时间,使灭菌后生物指示剂的阳性率在30%~95%之间;表1介绍了该款生物指示剂灭菌时间的筛选过程,三批次生物指示剂在灭菌时间为16min时,阳性率在40%~65%之间,均符合要求??梢匀啡虾笮拿鹁跫?21℃,16min。


02



 取3批次该产品,每批次100支生物指示剂,按照步骤(01)中确认的灭菌时间进行杀灭,即抗力仪中121℃灭菌16min。

03



杀灭结束后,按说明书要求进行接种操作,并转移至规定的培养条件下培养7天。按照预先确定的时间间隔,记录生物指示剂的阳性结果和阴性结果。例如,设定的时间间隔为24h,每隔24h进行结果记录,最终的培养时间结果以“h”为单位。测试结果见表2。

04



在相同的培养时间间隔下,3批次生物指示物阳性的数量与第7d的阳性生物指示物数量之间的相关度≥97%,即表2中“生长比例”≥97%,可以确认为最短的培养时间。计算公式如下:

由表2可知,第一次批次和第二批次指示剂在培养24h时,生长比例均<97%,无法以“24h”作为最短培养时间;当培养时间为48h时,三批次生物指示剂的生长比例均为100%,满足标准中“≥97%”的要求,可以选择48h作为该生物指示剂的最终培养时间。因此,泰林SS6-121型自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂的说明书标示的培养时间为48h。

目前,该方法在医疗器械、医院等应用广泛,如快速生物指示剂(培养时间一般为3h)、极速生物指示剂(培养时间一般为30min),这些生物指示剂呈阳性的确认主要通过检测生物指示剂的荧光强度。2023版《药品GMP指南》中明确指出,ISO 11138-8:2021Sterilization of health care products — Biological indicators —Part 8: Method for validation of a reduced incubation time for a biological indicator中描述了缩短培养时间的方法,只适用于特定行业(如医院或者医疗保健机构)下和某些生物指示剂,并不适用于制药行业。

ISO 11138-8规定的缩短生物指示剂培养时间的确认方法,确认灭菌时间后至少需要3批次生物指示剂,各100支,通过持续观察灭菌后生物指示剂阴性、阳性的数量,以确认最短的培养时间。

那么,现在你理解缩短生物指示剂培养时间是如何确认的了吗?





 

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