自 1874 年血细胞计数仪计数室发明以来，生物学家一直在通过显微镜下的人工检查来定量分配到载玻片室中的细胞。这些量化依赖于了解您正在计数的确切体积。使用血细胞计数器计数细胞时，以下公式用于将给定表面积/体积中的细胞计数转换为细胞/mL 浓度：

基于图像的自动细胞计数仪利用相同的原理在相机上定量已知体积的细胞。这种系统的主要好处是它们可以提供答案的速度和可重复性。例如，对于大多数样品，DeNovix CellDrop 自动细胞计数仪上的明场和双通道荧光计数不超过 10 秒。手工计数大多数样品并正确计算浓度需要几分钟。

手动细胞计数的挑战

手动计数样品中的活细胞需要经验来区分细胞类型、碎片和红细胞。不难想象，实验室的每个成员都可能以不同的方式解释同一样品，从而导致样品图像中的细胞浓度不同。另一方面，自动细胞计数仪利用一种算法，其中包含有关细胞表征方式的规则，因此计数不会因用户而异。

血细胞计数器依靠一种称为台盼蓝的比色染色剂来评估细胞活力。台盼蓝的作用是进入膜受损的死细胞并将其染成深蓝色。这种染料无法区分红细胞或其他容易被误认为是活细胞和实际目标细胞的碎片。这可能导致悬浮液中活细胞的高估，从而可能扭曲活细胞的准确计数。

为什么自动细胞计数可以提高准确性和效率

作为血细胞计数器的替代品，现代细胞计数仪（基于图像的自动细胞计数仪）克服了这些问题。这些系统使用先进的成像和软件算法在几秒钟内分析细胞计数和活力。与手动方法不同，自动计数器：

• 标准化细胞计数测量。

• 通过应用统一规则来识别样品中的细胞数量，消除不一致。

• 提供准确的计数，没有用户偏见。

此外，基于荧光的活力染色为台盼蓝染色提供了更可靠的替代方案，因为它选择性地仅标记有核活细胞，从而提高了细胞计数和活力评估的精度。

像 CellDrop 这样的自动细胞计数仪可以使用一对称为吖啶橙和碘化丙啶 （AO/PI） 的荧光活力染色剂。这些荧光染色剂的组合根据细胞核的存在特异性识别活细胞和死细胞，因为染料仅与 DNA 结合。这些污渍不会与红细胞或未成核的碎片相互作用，从而消除了主观性并提高了精度。

总而言之，基于图像的自动细胞计数仪需要较少的培训和专业知识来作，同时提高了整个实验室细胞计数的精度。计数也可以在手动计数类似样品所需时间的一小部分内进行。通过使用荧光活力染色剂，整个过程得到了进一步改进。最终，已经存在了 150 年的定量方法仍然适用于自动细胞计数仪，只是通过现代计算技术提高了效率。

最后的思考

对于希望提高细胞培养工作流程准确性和效率的实验室来说，自动细胞计数仪提供了传统计数室的替代方案。通过消除用户差异、结合基于荧光的染色并缩短计数时间，这些设备可确保以最小的努力精确测量细胞浓度（以细胞/mL 为单位）。