了解给定细胞群的数量和特征对于许多细胞/分子生物学研究至关重要。许多领域，如免疫学，在很大程度上依赖于量化群体中细胞数量以及这些细胞所具有的各种特征的能力。

血细胞计数器：一种传统的细胞计数方法

多年来，已经开发出许多技术，使科学家能够提出和回答这些问题。一种非常古老的技术是血细胞计数器，它允许科学家手动计数指定体积的细胞。简单地说，血细胞计数器上的不同网格和正方形由精确的表面积定义。表面积乘以网格上方盖玻片的高度，可提供精心指定的体积。

血细胞计数器的不精确性是由一些更现代的技术改进的因素引起的。例如，依靠人类对网格上微小物体的解释会引入用户之间的差异，这会根据多年的经验进一步分层。载玻片的不加工意味着腔室高度很少是真正的 100 μm，这会给方程增加假设，从而导致与真实计数的总体偏差。

细胞计数的现代解决方案

自动细胞计数仪

像 CellDrop 这样的自动细胞计数仪通过利用算法每次以相同的方式计数来克服这些挑战。CellDrop 的DirectPipette™ 技术还利用高精度电机将 100 μm 的精确腔室高度设置为 100 μm，每次都好的。自动细胞计数仪还受益于快速图像采集，消除用户偏差并显着提高实验的一致性。

流式细胞仪

流式细胞术细胞计数的另一种现代解决方案是流式细胞仪。流式细胞仪通过毛细管吸入细胞，然后将每个细胞以单条文件线通过一系列激光器，从而快速分析大量单个细胞。这些激光器除了检测前向散射（细胞直径）和侧向散射（细胞密度或体积）外，还可以检测与细胞表面结合的荧光团。

流式细胞术可实现高通量分析，快速表征数千至数百万个细胞，促进高效的数据采集。通常，分析设置为运行到达到指定数量的细胞，例如，100 万个细胞。靶向表面蛋白的荧光抗体使研究人员能够阐明不同亚群中细胞的百分比，从而识别所分析的总样品中的各种细胞类型。

流式细胞仪在细胞计数中的局限性

与任何技术一样，流式细胞仪也有局限性。虽然流式细胞仪在了解内部检测器经过的事件数量方面表现出色，但了解包含这些事件的精确进气量却不太容易测量。对于某些流式细胞仪，内部流体泵可以每年校准一次，以确保进气量足够精确，从而得出准确的细胞计数。通常，泵不容易校准或根本没有校准，这可能导致细胞/mL 定量不准确。此外，传统的流式细胞仪通常缺乏提供空间信息或详细单细胞图像的能力。

补充技术：流式细胞术和成像

为了克服这些限制，专家们经常用成像流式细胞术来补充流式细胞术。成像流式细胞仪将高分辨率图像捕获与传统流式细胞术原理相结合，可进行详细的流式细胞术图像分析。这提供了有价值的空间信息和细胞群荧光强度的量化，显着增强了细胞分析能力。成像流式细胞术还可以清楚地区分红细胞和有核细胞，这对于准确的细胞计数至关重要。

许多流式细胞术专家使用的另一种实用解决方案是在流式细胞仪上进行测量之前，使用另一种方法（例如自动细胞计数仪）对细胞进行计数。这结合了两种技术的优势，提供了精确的量化和详细的表征。

对具有 AO/PI 等荧光活力染色剂的细胞进行计数可产生清晰的荧光图像，从而直观地确认细胞活力状态。有关 AO/PI 染色如何为活力评估提供可靠样本图像的更多详细信息，请阅读此技术文档。当随后通过流式细胞仪分析相同的细胞群时，属于每个亚群的细胞百分比变得清晰。该数据可以与活细胞浓度相结合，以确定所分析的每个类别中的细胞数量。

总结

每个工具都有其擅长的特定用途。虽然许多工具可以用来完成它们不是为之设计的任务，但它们通常无法像专门为这项工作构建的工具那样出色。

这一原则适用于生物学中不同的细胞分析方法。没有一种工具在所有方面都好。相反，每项技术都与其他技术相辅相成，在特定领域表现出色并提供最佳数据。

通过结合基于图像的细胞计数和流式细胞术等强大的分析工具 ，可以实现最准确的细胞群定量和详细的表征，从而显着有利于生物医学研究。