一、磁极在磁性细胞分选中的作用原理
磁性细胞分选的核心步骤是:
磁性标记: 目标细胞通过与表面包被有特异性抗体(针对目标细胞表面标志物)的超顺磁性微珠结合,从而被“磁化”。
磁场分选: 将标记好的细胞悬液通过或置于细胞分选磁极产生的磁场区域。
分离捕获:
在高梯度磁场的作用下,结合了磁性微珠的目标细胞会被强大的磁力捕获并滞留在磁极表面或磁极内部的分离基质(如填充了铁丝的柱子)上。
未标记的非目标细胞则不受磁场影响(或影响极小),随液体流穿过磁极区域。
洗脱收集: 移除磁场后,被捕获的目标细胞失去磁力束缚,即可被洗脱下来进行收集。
磁极的核心作用就体现在第2和第3步: 它提供的高梯度磁场是区分和捕获磁性标记细胞与非标记细胞的物理基础。梯度越高,在微小距离上产生的磁力变化越大,对小尺寸磁性微珠的捕获效率就越高。
二、应用领域
免疫学研究: 分离特定免疫细胞亚群(如T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞、调节性T细胞等)进行功能研究。
干细胞研究: 富集造血干细胞、间充质干细胞等。
肿瘤学研究: 分离循环肿瘤细胞、肿瘤浸润淋巴细胞。
细胞治疗: 在CAR-T、TCR-T等过继性细胞免疫治疗中,分离、富集或去除特定细胞。
微生物学: 分离特定病原体或微生物。
分子生物学: 分离核酸结合蛋白或特定细胞器(需特殊磁珠)。
诊断: 用于某些体外诊断试剂盒中富集目标分析物。
三、选择与使用注意事项
匹配分选柱/容器: 磁极必须与所使用的分选柱(如MACS® Column)或样品容器(如试管、多孔板)的尺寸和形状精确匹配,以确保最佳的磁场覆盖和分选效果。
磁场强度与梯度: 根据目标细胞大小、磁珠大小和结合强度选择合适的磁极(通常厂商会标明其磁极性能)。处理难分细胞或需要ji高纯度时,可能需要更强磁场或更高梯度的磁极。
操作规范: 严格按照分选试剂盒或仪器说明书操作,包括上样速度、缓冲液选择、洗涤次数等,这些都会影响磁极的捕获效率和最终分选纯度/得率。
维护: 永磁体磁极避免剧烈撞击、高温和强反向磁场,以防退磁。电磁体注意散热和电路维护。
四、常见问题 (FAQ)
Q:磁极的磁场会伤害细胞吗?
A:磁场本身对细胞没有已知的直接伤害。分离的温和性主要源于磁珠与细胞的特异性结合以及低剪切力的操作过程。
Q:永磁体和电磁体哪个更好?
A:各有优势。永磁体简单便携成本低,适合手动操作和小样本;电磁体可控性强,便于自动化,适合大样本和需要精确控制磁场的应用。
Q:为什么需要高梯度磁场?
A:细胞携带的磁性微珠体积小、磁矩有限。高梯度磁场能在微小空间内产生足够强的磁力,确保这些小磁珠(及其标记的细胞)被有效捕获,而不仅仅是强磁?。ň却懦《孕〈胖樽饔昧苋酰?。
Q:分选纯度/得率不高可能和磁极有关吗?
A:有可能。磁极磁场强度不足、梯度不够、与分选柱/容器不匹配、或操作不当(如流速过快)都可能导致捕获效率下降,影响得率和纯度。但更多时候需先排查抗体-磁珠标记效率、样本制备、缓冲液等因素。
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