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模擬微重力通過優(yōu)化沉降促進 T7 噬菌體的自組裝

來源:北京基爾比生物科技有限公司   2025年07月24日 16:53  


一、研究背景與意義


長期太空任務(wù)中,宇航員健康面臨巨大風險,醫(yī)療資源受限于有效載荷和藥物穩(wěn)定性,且微重力等環(huán)境會損害免疫系統(tǒng)。
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按需生物制造(如利用無細胞轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)從DNA快速合成噬菌體等治療劑)被視為解決太空醫(yī)療問題的潛在方案,但其在太空條件下的合成與組裝機制尚不明確。
此外,微重力會影響生物分子自組裝(如蛋白質(zhì)結(jié)晶、病毒組裝)和生化反應(yīng)(如酶活性、DNA聚合酶保真性),但對無細胞轉(zhuǎn)錄翻譯(TXTL)系統(tǒng)的影響剛起步研究。   
二、研究目的 
探究模擬微重力(s-µg)對無細胞系統(tǒng)生產(chǎn)噬菌體T7的影響,重點分析轉(zhuǎn)錄、翻譯和自組裝三個關(guān)鍵過程,評估TXTL輔助太空按需生物制造的可行性。   
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三、實驗方法
 1. 模擬微重力裝置:使用回轉(zhuǎn)器模擬微重力,通過持續(xù)旋轉(zhuǎn)抵消重力向量,對照組為靜態(tài)環(huán)境(1-g)。 例如北京基爾比生物公司研制生產(chǎn)的應(yīng)用于微生物的微重力模擬系統(tǒng)】
2. 實驗體系:將T7噬菌體DNA與大腸桿菌無細胞提取物(TXTL試劑)混合,在PTFE管中進行反應(yīng),體積為20-50 µL。 
3. 檢測方法:通過噬菌斑測定計數(shù)感染性噬菌體;透射電鏡(TEM)觀察噬菌體形態(tài);免疫斑點雜交定量主要衣殼蛋白;質(zhì)譜分析T7蛋白質(zhì)組;qPCR檢測T7基因組拷貝數(shù)。  
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 四、核心研究結(jié)果 
1. 噬菌體產(chǎn)量提升:模擬微重力下,感染性T7噬菌體顆粒數(shù)量顯著增加,3小時時產(chǎn)量為靜態(tài)對照組的3.3倍,且整體具有統(tǒng)計學顯著性(p=0.033)。 
2. 合成過程無差異:免疫斑點雜交、質(zhì)譜分析顯示,兩組的主要衣殼蛋白及T7全蛋白質(zhì)組含量無顯著差異;qPCR也未檢測到T7基因組拷貝數(shù)的差異,說明轉(zhuǎn)錄和翻譯過程未受微重力影響。 
3. 自組裝增強:透射電鏡顯示,模擬微重力組完整噬菌體顆粒更多,不完整組裝體更少,結(jié)合蛋白和DNA含量無差異的結(jié)果,證實產(chǎn)量提升源于自組裝效率增強。 
4. 結(jié)果穩(wěn)健性:在不同實驗條件(如TXTL試劑批次、溫度、PEG濃度)下,模擬微重力增強噬菌體生產(chǎn)的現(xiàn)象仍較穩(wěn)定,僅高PEG濃度(4.5%)因粘度影響混合效率時無顯著差異。   
五、結(jié)論與展望 
模擬微重力通過減少沉降促進T7噬菌體的自組裝,而非增強合成過程,這一發(fā)現(xiàn)支持了無細胞合成實現(xiàn)“太空藥房”的可能性。未來需進一步研究真實太空條件(如輻射)對該系統(tǒng)的影響,同時可通過抑制沉降(如回轉(zhuǎn)、振蕩)優(yōu)化地球無細胞自組裝產(chǎn)物的生產(chǎn)。


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