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蛋白純化填料的制備技術(shù)已經(jīng)相對(duì)成熟
蛋白純化填料的制備技術(shù)已經(jīng)相對(duì)成熟，能夠?qū)崿F(xiàn)大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。無(wú)論是在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的小量蛋白質(zhì)純化研究，還是在大型生物制藥企業(yè)中的大規(guī)模蛋白質(zhì)藥物生產(chǎn)，都可以根據(jù)實(shí)際需求選擇合適的填料規(guī)格和數(shù)量，滿(mǎn)足不同層次的純化需求，并且能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
蛋白純化填料的基本工作原理：
(一)基于電荷相互作用
許多蛋白純化填料帶有特定的電荷基團(tuán)，例如陰離子交換填料攜帶負(fù)電荷，陽(yáng)離子交換填料攜帶正電荷。在一定的緩沖液條件下，蛋白質(zhì)分子根據(jù)其自身所帶電荷的性質(zhì)與填料發(fā)生靜電吸附。當(dāng)緩沖液的離子強(qiáng)度或 pH 值改變時(shí)，蛋白質(zhì)與填料之間的電荷吸引力減弱，從而使目標(biāo)蛋白質(zhì)被洗脫下來(lái)，而雜質(zhì)蛋白由于電荷性質(zhì)差異或與填料結(jié)合力不同而留在柱上或在不同洗脫條件下被分離。
(二)基于疏水相互作用
疏水性蛋白純化填料表面具有疏水基團(tuán)，蛋白質(zhì)分子中也存在疏水區(qū)域。在高鹽濃度環(huán)境下，蛋白質(zhì)的疏水區(qū)域會(huì)與填料的疏水基團(tuán)相互靠近并通過(guò)疏水相互作用結(jié)合。隨著鹽濃度降低，這種疏水相互作用減弱，目標(biāo)蛋白質(zhì)得以洗脫，從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的純化。這種基于疏水作用的純化方式對(duì)一些膜蛋白等疏水性較強(qiáng)的蛋白質(zhì)純化較為有效。
(三)基于親和特異性
親和層析填料是利用蛋白質(zhì)與特定配體之間的高度特異性親和力來(lái)實(shí)現(xiàn)純化的。例如，酶與其底物、抑制劑，抗體與抗原等之間存在特異性的親和關(guān)系。將相應(yīng)的配體固定在填料上，當(dāng)含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的樣品通過(guò)時(shí)，目標(biāo)蛋白質(zhì)會(huì)特異性地與配體結(jié)合，而其他雜質(zhì)蛋白則不被吸附或吸附較弱。通過(guò)改變洗脫條件，如使用含有競(jìng)爭(zhēng)性配體或改變緩沖液成分等方法，可以使目標(biāo)蛋白質(zhì)從填料上解吸附并被收集，從而達(dá)到高度純化的目的。
(四)基于分子篩原理
分子篩型蛋白純化填料具有特定孔徑大小的多孔結(jié)構(gòu)。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合液通過(guò)填料時(shí)，較小分子量的蛋白質(zhì)能夠進(jìn)入填料的孔隙內(nèi)部，而較大分子量的蛋白質(zhì)則被排斥在外。在洗脫過(guò)程中，小分子量蛋白質(zhì)由于在孔隙內(nèi)擴(kuò)散路徑較長(zhǎng)，洗脫速度相對(duì)較慢；大分子量蛋白質(zhì)則較快地被洗脫出來(lái)，從而根據(jù)分子量大小實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離純化。
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