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貝類5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒操作注意事項

來源:上海谷研實業(yè)有限公司   2025年07月18日 14:03  

     在完成試劑配制和樣本預處理后,需特別注意以下操作細節(jié)以確保檢測準確性:

1. 加樣標準化

使用多通道移液器時,建議提前校準移液頭精度,每孔加樣量誤差需控制在±2%以內(nèi)。對于高黏度貝類組織勻漿,建議采用反向吸液法,并在加樣前用預冷PBS潤洗槍頭3次,避免樣本掛壁導致的體積偏差。

2. 溫育環(huán)境控制

37℃孵育階段應(yīng)使用具有主動循環(huán)功能的恒溫箱,并在反應(yīng)板表面覆蓋密封膜時預留5mm透氣邊縫,防止冷凝水積聚。每30分鐘人工搖板1次(振幅10cm,頻率60次/分鐘),可顯著提高抗原抗體結(jié)合效率。

3. 洗板關(guān)鍵參數(shù)

自動洗板機建議設(shè)置"預洗-浸泡-終洗"三步程序:預洗液量300μL/孔(流速1mL/s),Tris緩沖液浸泡60秒,終洗采用脈沖式?jīng)_洗(5次×200μL/次)。手工洗板時需保持洗液注滿板孔后靜置90秒,棄液時板體傾斜45°角輕叩10次。

?4. 顯色終止時機

當標準品最高濃度孔OD值達到0.8-1.2時(波長450nm),應(yīng)立即終止反應(yīng)。對于富含黑色素的貽貝樣本,建議在終止后30分鐘內(nèi)完成讀數(shù),并使用620nm參比波長校正濁度干擾。

5. 數(shù)據(jù)質(zhì)控要點

每批次應(yīng)包含3個質(zhì)控樣本:空白對照(零標準品)、基質(zhì)加標回收樣(80-120%回收率)、重復樣(CV值<8%)。當標準曲線R2值<0.99時,需復核標準品梯度稀釋步驟是否出現(xiàn)跳管污染。

特殊情況下(如檢測扇貝生殖腺樣本),可適當調(diào)整樣本稀釋倍數(shù)至1:5,并延長封閉時間至45分鐘。所有操作需在避光環(huán)境下完成,避免5-HT光降解。實驗結(jié)束后,剩余96孔板條應(yīng)立即裝入含干燥劑的鋁箔袋,4℃保存不超過72小時。


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