一、菌種簡介

平臺編號：Bio-099488

規(guī)格：凍干物

拉丁屬名：Xanthomonas Oryzae

菌株名稱：水稻黃單胞菌(水稻白葉枯菌)

收藏時間：1992/3/26

原始編號：江陵691

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；教學

特征特性：非模式菌株。革蘭氏反染色呈現(xiàn)陰性，能以除草劑阿特拉津為氮源生長。可以用于阿特拉津污染環(huán)境的生物修復。

生物危害程度：四類

致病對象：無

培養(yǎng)基編號：14

培養(yǎng)溫度：25-28℃

用途：研究

注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）

二、產(chǎn)品特點

1、菌種功能明確、品種穩(wěn)定；

2、本品芽孢含量高，穩(wěn)定性好、耐高溫和擠壓；

3、繁殖能力快、定植能力強、易存活、耐受低pH值環(huán)境；

4、復活迅速，可在短期內成為優(yōu)勢種群；

5、本品安全高效、無抗藥性、不污染環(huán)境；

6、對多數(shù)抗生素不敏感，可與低濃度抗革蘭氏陰性菌抗生素同時使用。

三、培養(yǎng)基

*PDA 或者 TSA

四、保藏條件

斜面菌種和凍干菌種應在 2-8°C 保存。西林瓶請置于-20°C 保存。甘油請置于-80°C。

五、培養(yǎng)方法

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

六、注意事項

1）凍干粉需一次性使用完，以 200ul-500ul 推薦培養(yǎng)基的液體溶解，接種量為 2 支斜面（18*180 試管）或者 2 支 5ml 的液體。請不要在平板上更不要在錐形瓶中復蘇菌種。待菌種活化成功后才能擴大培養(yǎng)。經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間；

2）若您收到的是已復蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實驗，或根據(jù)需要轉接培養(yǎng)如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術人員，避免不必要的損失；

3）微生物菌種應保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；

4）菌種操作應在無菌條件下進行；轉種完畢，應經(jīng)滅菌再做丟棄處理；

5）應根據(jù)菌種狀況及時轉接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；

6）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應及時和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。

7）如若有菌種復蘇不活或者污染等情況，請在收到后 2 個月內聯(lián)系，逾期不予受理；

8）打管操作需由專業(yè)微生物技術人員在相應的防護設備中進行，生物危害程度為三類的菌種應在生物安全柜中操作，打管時凍干管應遠離面部，保護眼睛。

9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。

10）甘油管使用：使用本甘油菌時可以不用融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液體培養(yǎng)即可。也可以融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細菌的活力會逐漸下降。

七、保存方法

1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。

2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

3、懸液保存法：

①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。

②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

4、載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

5、常用的冷凍保存法：

①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍的微生物保存法。

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