（基于營養(yǎng)缺陷型篩選原理，實現(xiàn)基因編輯細胞的高效富集）

一、核心定義與作用

四缺培養(yǎng)基指同時缺失 4種關鍵營養(yǎng)成分 的選擇性培養(yǎng)基，主要用于：

• 篩選基因編輯成功細胞（如CRISPR敲除、過表達）

• 維持質粒穩(wěn)定表達（防止未轉染細胞干擾）

• 研究基因互作關系（如酵母雙雜交系統(tǒng)）

名稱由來：在基礎培養(yǎng)基上定向去除 亮氨酸（Leu）、色氨酸（Trp）、組氨酸（His）、腺嘌呤（Ade） 四種營養(yǎng)因子。

二、篩選原理：營養(yǎng)缺陷型“生存游戲”

1. 基因工程中的經(jīng)典策略

載體設計：
改造的表達載體攜帶特定 營養(yǎng)合成基因（如 LEU2, TRP1）

• 篩選邏輯：

• 成功轉入載體的細胞 → 表達合成基因 → 自主生產(chǎn)缺失營養(yǎng) → 存活

• 未轉染/轉染失敗細胞 → 無法合成必需營養(yǎng) → 死亡

2. 四缺環(huán)境的關鍵優(yōu)勢

? 超高篩選嚴謹性：細胞必須同時表達4種補償基因才能存活（防假陽性）
? 適配多質粒共轉染：不同載體攜帶互補營養(yǎng)基因（如雙質粒系統(tǒng)需 LEU2+TRP1）

三、典型應用場景

*注：哺乳動物細胞常用 HAT培養(yǎng)基（次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸苷）作為類似篩選系統(tǒng)。

四、實操注意事項

1. 配制關鍵點

• 基礎培養(yǎng)基選擇：

• 酵母：SD Base（合成成分明確）

• 哺乳細胞：DMEM高糖型（需定制去除特定氨基酸）

• 無菌添加物：

• 缺失成分對應的“營養(yǎng)補償混合物”（如Clontech的DO Supplement）

2. 常見問題解決

五、四缺 vs 其他缺陷培養(yǎng)基

六、代表產(chǎn)品與選擇指南

1. Thermo Fisher（Gibco定制服務）

• 產(chǎn)品：定制四缺DMEM/F12（指定缺失氨基酸）

2. Sino Biological（國產(chǎn)替代）

• 產(chǎn)品：預混四缺培養(yǎng)基（適配HEK293/CHO細胞）

• 貨號：M2680

總結

四缺培養(yǎng)基是分子生物學研究的 “黃金篩網(wǎng)” ：

1. 核心價值：通過 多重營養(yǎng)缺陷 實現(xiàn)超高篩選嚴謹性

2. 應用場景：酵母雙雜交、CRISPR多基因編輯、穩(wěn)定株構建

3. 操作鐵律：

• 載體必須攜帶對應營養(yǎng)補償基因

• 嚴格無菌配制防止污染

技術本質：利用細胞代謝缺陷與基因補償?shù)木珳蕦P系，實現(xiàn)目的細胞的“優(yōu)勝劣汰”。

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