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Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑標(biāo)準(zhǔn)操作步驟

來源:天津益元利康生物科技有限公司   2025年07月01日 14:51  

以下是 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑 的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟(適用于貼壁細(xì)胞),操作前請確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)、核酸純度及實(shí)驗(yàn)條件適配性。

一、試劑準(zhǔn)備

試劑名稱

要求

jetPRIME®

使用前平衡至室溫,輕渦旋混勻(勿劇烈震蕩)

核酸(DNA/siRNA

高純度(OD<sub>260/280</sub>≈1.8-2.0),無菌無內(nèi)毒素,溶于無菌水或TE緩沖液

jetPRIME® Buffer

提供無菌緩沖液(若試劑盒內(nèi)含)

細(xì)胞培養(yǎng)基

含血清 & 抗生素(轉(zhuǎn)染全程無需更換無血清培養(yǎng)基)

 

二、 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑操作流程(24孔板為例)

 Day 0: 細(xì)胞鋪板

1. 細(xì)胞計(jì)數(shù):消化對數(shù)生長期細(xì)胞,調(diào)整密度。  

2. 鋪板:  

   - 每孔加入 0.5~1×10? cells(貼壁細(xì)胞)  

   - 500μL wan-quan培養(yǎng)基(含10%血清+抗生素)培養(yǎng)。  

   - 關(guān)鍵:轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度需達(dá) 70~90% 匯合度(過度生長降低效率)。

 Day 1: 轉(zhuǎn)染(耗時(shí)<15分鐘)

> ?? 所有步驟在無菌環(huán)境(超凈臺)操作,試劑室溫平衡。

步驟

操作

1. 稀釋核酸

 1μg DNA(或 1.5~5nM siRNA)加入 200μL jetPRIME Buffer 中,輕混勻(如無Buffer可用無菌Opti-MEM替代)。

2. 加轉(zhuǎn)染試劑

向稀釋核酸中加入 2μL jetPRIME®DNA:jetPRIME = 1μg:2μL)。

3. 混合孵育

立即渦旋10 → 室溫靜置10分鐘(溶液變渾濁屬正常現(xiàn)象)。

4. 加入細(xì)胞

將混合液 逐滴加入細(xì)胞孔,輕搖培養(yǎng)板混勻。

5. 繼續(xù)培養(yǎng)

放回37℃ CO<sub>2</sub>培養(yǎng)箱,無需更換培養(yǎng)基。

 

 三、關(guān)鍵優(yōu)化參數(shù)

變量

推薦條件

調(diào)整建議

細(xì)胞密度

70~90% 匯合度

過密降低效率;過低細(xì)胞毒性

DNA:jetPRIME比例

1μg DNA : 2μL 試劑(24孔板標(biāo)準(zhǔn))

按比例放大/縮?。ㄈ?/span>6孔板用4μg DNA+8μL試劑)

siRNA用量

終濃度 10~50nM(參考細(xì)胞類型)

敏感細(xì)胞從低濃度(10nM)起始測試

孵育時(shí)間

轉(zhuǎn)染后 24~72小時(shí) 檢測表達(dá)(峰值通常48h

熒光蛋白觀察24h,功能實(shí)驗(yàn)需48~72h

 

 

 四、懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟

若轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞(如JurkatTHP-1):  

1. 離心收集細(xì)胞 重懸于 新鮮培養(yǎng)基(密度 0.5~1×10? cells/mL)。  

2. 1mL細(xì)胞懸液 + 混合液(1μg DNA + 2μL jetPRIME) 加入EP管。  

3. 輕柔混勻 → 37℃靜置 15~30分鐘 轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)。

 五、 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑使用注意事項(xiàng)

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1. 細(xì)胞狀態(tài):僅用健康、低傳代細(xì)胞(傳代<30)。  

2. 試劑保存:jetPRIME® 4℃避光保存(非-20℃),保質(zhì)期內(nèi)穩(wěn)定。  

3. 避免污染:核酸和Buffer嚴(yán)格無菌操作。  

4. 毒性處理:若細(xì)胞死亡率高:  

   - ↓ 降低jetPRIME用量(如1μg DNA1.5μL試劑)  

   - ↓ 縮短轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)時(shí)間(24h后換液)。  

5. 對照設(shè)置:必設(shè) 空載體對照組 + 未轉(zhuǎn)染組。

 六、Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑替代方案(特殊情況)

場景

替代方案

高難度細(xì)胞(原代、神經(jīng)元)

改用 jetOPTIMUS®

體內(nèi)轉(zhuǎn)染

搭配 in vivo-jetPEI®

大片段DNA>15kb

測試 jetPEI®

 

 

 

 

問題排查:若效率低 檢查核酸純度、細(xì)胞密度、試劑比例;或聯(lián)系 polyplus代理——天津益元利康生物科技有限公司獲取技術(shù)支持。

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