酶標板實驗優(yōu)化：加樣、洗滌、讀板全流程技巧

　　以下是天津本生對酶標板實驗全流程優(yōu)化的關(guān)鍵技巧，涵蓋加樣、洗滌和讀板三大核心環(huán)節(jié)：

　　一、加樣優(yōu)化技巧

　　精準加樣控制?

　　使用多道移液器(誤差<2%)，單次加樣時間控制在10分鐘內(nèi)，避免預(yù)孵育時間差異影響重復(fù)性

　　高濃度樣本需預(yù)稀釋(如1:20 PBS稀釋)，溶血樣本應(yīng)棄用

　　防蒸發(fā)處理?

　　孵育時反應(yīng)板需加蓋密封膜，并置于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)保持濕度

　　液體樣本4℃保存≤1周，-80℃長期保存需密封防凍干

　　二、洗滌關(guān)鍵參數(shù)

　　操作要點 優(yōu)化方案 注意事項

　　洗滌液配制 Tween-20濃度0.05%-0.1%，含0.5M NaCl 避免使用含疊氮鈉的緩沖液(HRP系統(tǒng))

　　洗滌次數(shù) 常規(guī)3-5次，高背景樣本增至8次 競爭法需控制單次洗滌≤2分鐘

　　拍干方式 倒置拍板力度均勻，使用無屑濾紙 垂直猛拍易導致包被物脫落

　　三、讀板質(zhì)量控制

　　顯色控制?

　　底物加入后每10分鐘觀察顯色，強陽性孔需提前終止

　　雙波長檢測(主450nm/參比630nm)可減少孔間干擾

　　儀器校準?

　　讀板前預(yù)熱酶標儀，設(shè)置溫控參數(shù)(如37℃±0.5℃)

　　邊緣孔數(shù)據(jù)棄用，僅分析中間60孔保證一致性

　　四、特殊樣本處理

　　高脂血樣本?：12000rpm離心10分鐘去除脂蛋白

　　組織勻漿?：添加RIPA裂解液后-80℃保存，避免反復(fù)凍融

　　流程銜接提示?：

　　洗滌后需立即進行下一步操作，酶標板干燥會導致復(fù)合物失活

　　自動化洗板機需定期校準吸液高度(距孔底0.5-1mm)

　　注：以上資料僅供參考，如需完整說明，建議聯(lián)系供應(yīng)商獲取隨貨文件。

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