一、背景

小鼠胎兒真皮成纖維細胞提取物是從小鼠原代胎兒真皮成纖維細胞提取的，小鼠原代胎兒真皮成纖維細胞從正常小鼠胚胎組織制備。小鼠胎兒真皮成纖維細胞提取物可以用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

小鼠胎兒真皮成纖維細胞主要分布于黏膜和皮下疏松結(jié)締組織，胞質(zhì)內(nèi)富含嗜堿性顆粒，細胞表面能夠表達高親和力FcεRI，可結(jié)合游離IgE，參與I型超敏反應。小鼠胎兒真皮成纖維均來自正常小鼠胎兒真皮組織，采用組織塊培養(yǎng)法制備而來。

小鼠胎兒真皮成纖維細胞提取物可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。小鼠真皮成纖維細胞分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。

二、應用

小鼠胎兒真皮成纖維細胞提取物可用于真皮間充質(zhì)干細胞對瘢痕疙瘩成纖維細胞生物學活性的影響：

目的通過研究FDMSCs條件培養(yǎng)基(FDMSCs conditioned medium,F-CM)對瘢痕疙瘩成纖維細胞(Keloid fibroblasts,KFs)生物學活性的影響,探索FDMSCs相關(guān)療法治療瘢痕疙瘩的可行性。真皮成纖維細胞(Adult dermal fibroblasts,ADFs)、FDMSCs和KFs,并應用ADFs和FDMSCs制備ADFs條件培養(yǎng)基(ADFs conditioned medium,A-CM)和F-CM。

KFs分別用空白對照培養(yǎng)基(SFM)、A-CM和F-CM培養(yǎng),培養(yǎng)48h后對各組KFs進行一系列實驗分析,包括細胞形態(tài)觀察(倒置顯微鏡下)、細胞數(shù)量變化(MTT比色實驗)、細胞增殖率和凋亡率改變(BrdU細胞增殖實驗和TUNEL細胞凋亡實驗)、細胞共培養(yǎng)干預實驗和條件培養(yǎng)基干預實驗對比、凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達變化(qPCR和Western blot)、細胞凋亡時期檢測(Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測)結(jié)果通過一系列實驗,結(jié)果顯示相對于對照組和A-CM組,F-CM可以誘導KFs出現(xiàn)凋亡形態(tài),并可減少活細胞的數(shù)目。但KFs增殖率沒有明顯改變但凋亡率明顯增加,這說明細胞數(shù)目的減少主要得益于細胞凋亡的增多。

FDMSCs與KFs共培養(yǎng)實驗的結(jié)果同培養(yǎng)基干預KFs實驗結(jié)果沒有明顯區(qū)別。進一步實驗表明F-CM可促進細胞促凋亡蛋白BCL-2的表達并抑制細胞抑凋亡蛋白BAX的表達,導致BCL-2/BAX升高而促進細胞凋亡。Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡實驗結(jié)果表明細胞凋亡時期主要為晚期凋亡。

結(jié)論：

(1)FDMSCs可成功從早期人胎兒皮膚中提取并進行體外培養(yǎng)、傳代,并能維持穩(wěn)定的生物學特性。

(2)F-CM干預KFs實驗結(jié)果與細胞共培養(yǎng)干預實驗結(jié)果一致,避免了FDMSCs直接應用于機體的潛在風險。

(3)F-CM可以通過抑制細胞抑凋亡蛋白BCL-2的表達并促進細胞促凋亡蛋白BAX的表達來促進細胞凋亡。

(4)F-CM所誘導的KFs凋亡時期主要為晚期凋亡。

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