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大小鼠中綠膿桿菌的感染和檢測方法

來源:上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司   2025年06月14日 21:55  

綠膿桿菌廣泛存在于自然界中,革蘭氏陰性桿菌,常寄生于人和動物的體表、呼吸道、消化道,免疫力下降是重要的發(fā)病誘因,當(dāng)機(jī)體免疫力低下時可引起全身性感染在燒傷感染中綠膿桿菌檢出率較高,也有綠膿桿菌引起新生兒腹瀉爆發(fā)流行的案例。

對實(shí)驗(yàn)動物而言,SPF 小鼠及無菌小鼠被綠膿桿菌感染后,多數(shù)不表現(xiàn)癥狀,以潛伏感染為主,當(dāng)宿主免疫系統(tǒng)受損,??梢鸶腥?、炎癥、敗血癥甚至死亡等。但進(jìn)行醫(yī)藥、生物制品實(shí)驗(yàn)時,常影響試驗(yàn)結(jié)果,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗,故綠膿桿菌已被列為無特定病原體小鼠必須排除的細(xì)菌之一。綠膿桿菌感染實(shí)驗(yàn)動物,給育種繁殖工作帶來困難,綠膿桿菌對實(shí)驗(yàn)動物的危害應(yīng)引起足夠的重視。

綠膿桿菌是SPF級小鼠必檢項(xiàng)目, 主要定植于腸道內(nèi)和糞便中。實(shí)驗(yàn)動物的細(xì)菌可以在特定的部位定植, 可在不同的培養(yǎng)基中生長, 有不同的菌落形態(tài)。與生化試劑有特殊的生化反應(yīng)。80年代為迅速測出SPF 小鼠體內(nèi)是否被綠膿桿菌感染,曾經(jīng)用噬菌體裂解試驗(yàn)。

綠膿桿菌的檢測目前多采用病原學(xué)的檢測方法, 即通過分離培養(yǎng)、菌落形態(tài)特征和生化反應(yīng)特征來確定動物體中是否感染病原菌。這是目前較為可靠、直接的檢測方法。該方法在實(shí)驗(yàn)動物細(xì)菌學(xué)檢測中應(yīng)用廣泛, 也是主要的檢測方法。但是, 該方法具有操作不便、工作量大等缺點(diǎn)。

新國標(biāo)GB14922-2022中指出,綠膿桿菌的檢測用GB14926的檢測方法進(jìn)行檢測。國標(biāo)GB14926中指出:“綠膿桿菌是革蘭陰性桿菌,具有產(chǎn)生綠色色素和氧化酶等生化試驗(yàn)特征。因此,可利用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)、菌體檢驗(yàn)和生化試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。”根據(jù)國標(biāo)的內(nèi)容,綠膿桿菌大部分菌落可產(chǎn)生綠色色素而致使培養(yǎng)基呈綠色。當(dāng)被檢菌為革蘭陰性桿菌,氧化酶陽性及產(chǎn)生綠色色素,可報(bào)告檢出綠桿菌。有時也需要結(jié)合一些生化反應(yīng)來確認(rèn)綠膿桿菌的感染。

當(dāng)前分子生物學(xué)的PCR檢測方法也是綠膿桿菌的重要檢測方式,這種檢測方法的優(yōu)點(diǎn)是檢測的靈敏度高,方便快捷,避免了菌株培養(yǎng)的繁瑣流程和時間。一般6小時之內(nèi)可以出檢測結(jié)果。正是由于這種便捷性和靈敏度,越來越多實(shí)驗(yàn)者使用PCR方式進(jìn)行綠膿桿菌的檢測和陽性復(fù)檢確認(rèn)。




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