（1）滴水破开法

首先将冻干粉甩至底部圆球位置，然后用70%的酒精脱脂棉球擦净冻干管，将冻干管的尖-端（注意不是圆球端）放在火焰上加热。然后迅速滴几滴无菌水至加热处，此时冻干管的尖-端会自动破开。最后用镊子轻轻敲下冻干管尖-端，并将冻干管开口处在火焰上加热灭菌一下，并且保持下面的菌种菌种活化步骤在火焰旁操作。然后逐渐敲开冻干管，直至适当位置。（敲开位置以可以很好注入无菌水以及吸取混匀后的液体为准）

(1)酒精灯上加热

(2)滴加冷的无菌水，菌种管自动裂开

(3)镊子掰开

(4) 加入无菌水混匀菌粉，然后全部

（2）直接敲开法

首先将冻干粉甩至底部圆球位置，然后用70%的酒精脱脂棉球擦净冻干管，将冻干管的尖-端（注意不是圆球端）放在火焰稍微加热灭菌。然后直接用大镊子敲打尖-端，敲开后将破口处在火焰上加热灭菌一下，并且保持下面的菌种菌种活化步骤在火焰旁操作。 然后逐渐敲开冻干管，直至适当位置。（敲开位置以可以很好注入无菌水以及吸取混匀后的液体为准）。

1)直接用镊子敲开

(2)加入无菌水混匀菌粉，然后全部接种至培养基上

菌种复苏中注意事项：

（1）菌种活化前，如要长期保藏，可将冻干管放在4-10度条件下保存。

（2）此冻干菌是经冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能剩菌粉下次使用。

（3）冻干管中大部分是用牛奶做?；ぜ粒逦偈?，复苏时要全部菌悬液接种在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。

（4）冻干粉是在冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长出，请继续在相应的环境下多培养24小时或更长时间，直至菌种培养出。

（5）正常情况下，菌种是需要培养2代后才会具备稳定的活性，所以建议做2次继代培养后才能用于您后续的实验。

（6）打开冻干管应在专业的微生物专业人员才可操作，注意生物危害程度为三级的菌种应在生物安全柜中操作。其中标准菌种可以在超净台中操作，并且做好个人防护?？苁币⒁庾龊酶鋈嗣娌糠阑?，防止碎片飞入眼中。

（7）以上开管操作都应该在安全柜或超净台中操作，并且操作完后所有器皿都要经灭菌后再销毁。