一、方法學缺陷:競爭抑制法成重災區(qū)
操作時差效應:競爭抑制法(HBeAb/HBcAb檢測常用)易因加樣時間差異導致不-公平競爭,重復性差
質量控制難點:相較于雙抗體夾心法等,該模式對溫育時間敏感度更高
二、試劑因素:批間差異與保存條件
生產波動:不同批次間活性成分濃度存在天然差異,建議選擇長批號試劑
儲存不當:2-8℃避光保存為基本要求,反復凍融會破壞酶標記物活性(尤其HRP標記抗體)
分裝技巧:使用率低的試劑應分裝保存,避免整盒反復凍融
三、樣本污染:隱形殺手清單
干擾類型具體表現(xiàn)內源性類風濕因子、補體、異嗜性抗體等造成假陽性外源性溶血、細菌污染、反復凍融標本導致蛋白降解
四、操作失誤:細節(jié)決定成敗
加樣誤差:未更換吸頭導致交叉污染
溫育失控:溫度波動超過±1℃顯著影響抗原抗體結合
洗滌不徹-底:殘留物質干擾顯色反應
五、環(huán)境因素:容易被忽視的威脅
光照破壞:底物B對光敏感,需避光操作
化學污染:實驗臺面消毒劑殘留可能抑制酶活性
揮發(fā)損失:開蓋時間過長導致液體試劑濃度改變
六、過期失效:時間成本不可逆
活性衰減:超過有效期后抗體效價急劇下降
標準品失效:稀釋后的標準品禁止二次使用
實用解決方案
采用真空采血管避免溶血
每板設置復孔提高數(shù)據(jù)可靠性
建立試劑驗收記錄表追蹤批號性能
溫馨提示:定期校準移液器,建議每季度進行1次重力校準(特別是微量移液器)
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