植物細胞組織破碎,通常有,高剪切均質破碎/玻璃勻漿器破碎/液氮研磨破碎/超聲波破碎等。今天我們就常用的高剪切均質破碎和玻璃勻漿破碎進行簡要說明和對比。

高剪切均質破碎植物組織
使用高剪切均質機破碎植物組織是一種高效、快速的機械破碎方法,適用小體積到大量樣品處理或對均質化要求較高的實驗(如蛋白質提取、代謝組學、核酸分離等)。其原理是通過高速旋轉的轉子與定子產(chǎn)生強烈的剪切力,使組織在短時間內破碎成勻漿。
樣品預處理
新鮮植物組織(如葉片、根、莖等)切成小塊,樣品的直徑要小于分散刀頭直徑的1/2。
若樣品較硬(如種子、木質部),可先進行預破碎(可選擇WIGGENS的WMA系列組織到隨機)再均質。
樣品與緩沖液比例建議 1:5~1:10(w/v)(如 1 g組織 + 5~10 mL 緩沖液)。
均質操作
根據(jù)樣品量選擇合適的均質機和分散刀頭小量樣品。(WIGGENS的D-130型均質機可以在1.5ml離心管中處理樣品,處理量0.2-1ml。 D500系列均質機處理量0.5L-8L。)
低速啟動(5000~10000 rpm)初步破碎組織,避免飛濺。
高速剪切(15000~25000 rpm)處理 10~60 秒(可間歇操作,如 10 秒開 / 10 秒停,防止過熱)。
推薦使用帶有擾流板的均質杯,擾流板可以減少均質時間提高均質效率。
清洗設備
均質完畢后,需要對分散刀頭和分散杯進行清洗,防止殘留物堵塞或腐蝕。推薦使用WIGGENS超聲波清洗機。
根據(jù)樣品特性進行均質操作
柔軟組織(如葉片):較低轉速(10000~15000 rpm)即可。
纖維/堅硬組織(如根、種子):需更高轉速(20000~30000 rpm)或延長處理時間。
多酚/多糖含量高的植物(如茶葉、果實):易氧化或形成粘稠勻漿,可添加 PVP(聚乙烯吡咯烷酮) 或 β-巰基乙醇 減少干擾。
溫度控制
冰浴操作,避免局部過熱導致蛋白變性。如樣品量較大,可分批次處理。
安全防護
戴 護目鏡/面罩,防止樣品飛濺。
確保分散頭浸入液體,避免空轉損壞設備。

手持式均質機適合小量樣品破碎

臺式均質器適合大量樣品破碎

帶有擾流板的分散杯,提高樣品破碎效率

超聲波清洗機用于轉子和分散杯
玻璃勻漿器破碎植物組織
使用玻璃勻漿器破碎植物組織是一種常見的實驗室方法,適用于細胞破碎、細胞器釋放或勻漿制備。
樣品預處理:使用蒸餾水或緩沖液清潔植物組織(如葉片、根等),切成小塊(約0.5 cm2),若組織較硬,可先液氮冷凍后研磨成粉末,再轉入勻漿器。
將組織塊或粉末與適量裂解緩沖液(如PBS、Tris-HCl等,含蛋白酶抑制劑)加入勻漿器內管中,液體體積不超過1/3容量。
可根據(jù)需要選擇手動勻漿或電動勻漿。手動勻漿,手握研杵垂直旋轉,上下輕柔研磨(10-20次),避免氣泡產(chǎn)生;或左右旋轉研磨(適用于韌性組織);電動勻漿:控制低速(500-1000 rpm),短時間間歇操作(避免過熱)。
如有必要,操作過程需要對勻漿器進行預冷,操作要進行冰上操作,減少蛋白,核酸等降解。
玻璃勻漿器切記操作傾斜或用力過猛,容易導致玻璃勻漿器過度磨損或破裂
如果提取的細胞器破裂,需要減少勻漿次數(shù)或更換間隙更大的勻漿器
使用后立即用去離子水沖洗,酒精擦拭或使用超聲波清洗機清洗,防止殘留物干結。
雙杵玻璃勻漿器有不同的杵缽的間隙,用于細胞器提取或核酸/蛋白提取

中空研杵的類型,可在中空部位加冰,用于低溫勻漿

WOHS頂置電機可用于電動玻璃勻漿器
高剪切均質和玻璃勻漿器處理植物組織樣品的對比:
方法 | 適用場景 | 優(yōu)缺點 |
高剪切均質機 | 小批量/大批量、快速破碎 | 高效,但可能產(chǎn)熱 |
玻璃勻漿器 | 小樣本、溫和破碎 | 溫和但效率低 |
相關產(chǎn)品
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