圖2 巨玫瑰葡萄

圖3 巨玫瑰葡萄植株

   葡萄園隨機(jī)選取兩行葡萄植株作為固定采樣點(diǎn)。采樣時(shí)兼顧果穗上中下及陰陽(yáng)面，利用五點(diǎn)取樣法從每穗采集無(wú)損傷和病害的葡萄顆粒。采樣周期從葡萄轉(zhuǎn)色期至成熟期。每隔3～5d進(jìn)行1次采樣，每次采集 280 ～ 320 粒葡萄，并按照顏色和硬度進(jìn)行分組，40 粒為一組，分為7～8組。采樣周期內(nèi)共采集24批試驗(yàn)樣品，共計(jì)178組，每個(gè)樣品測(cè)定20顆巨玫瑰果粒的光譜信息，并將相應(yīng)的20顆巨玫瑰果粒－40℃冷凍保存進(jìn)行后續(xù)理化值測(cè)定。

 圖4 光譜采集系統(tǒng)

   如圖所示，為減少雜散光干擾，光譜采集在暗室中進(jìn)行，以白板為背景放置葡萄樣本。采集系統(tǒng)由鹵素?zé)?、光纖探頭、光纖光譜儀、標(biāo)準(zhǔn)漫反射白板及樣本組成。其中鹵素?zé)艄庠?、暗室、光纖探頭共同構(gòu)成手柄燈光譜采集模塊，末端通過(guò)光纖和光譜儀連接。光譜儀使用奧譜天成（Optosky）的ATP3030高分辨率型微型光纖光譜儀，積分時(shí)間1ms，分辨率0.5nm，光譜范圍200-1100nm。

   首先通過(guò)光譜采集模塊對(duì)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)漫反射白板，采集其反射光譜作為標(biāo)準(zhǔn)參考數(shù)據(jù)，再將單粒葡萄樣本放在漫反射白板上并置于手柄燈暗室內(nèi)，搭配軟件反射率測(cè)量模塊，最終獲得該樣本反射光譜。此外，測(cè)量過(guò)程沿葡萄樣本赤道以120°間隔測(cè)量3次取平均值作為最終光譜數(shù)據(jù)。

圖5 成熟期葡萄反射率曲線

   為消除光譜儀及外界因素影響，去除前端部分光譜波段，選擇波長(zhǎng)范圍 400～1100 nm進(jìn)行后續(xù)建模分析。

   在原始光譜中葡萄樣品的可見(jiàn)-近紅外光譜雖存在重疊和交叉的情況，但整體上變化趨勢(shì)基本一致。在光譜范圍500～720nm內(nèi)，光譜曲線存在一定的差異性，原因可能在于葡萄成熟品質(zhì)不同致使其果皮顏色存在差異，進(jìn)而影響光譜的吸收。光譜曲線在波長(zhǎng)720nm附近存在明顯的吸收峰，分析其原因可能與胡蘿卜素、葉綠素的吸收有關(guān)。在光譜范圍850～920nm內(nèi)，光譜曲線出現(xiàn)吸收帶，其原因可能與酚類和花青素、纖維素和蔗糖等的吸收有關(guān)。此外，光譜曲線在1000～1050nm范圍內(nèi)出現(xiàn)吸收帶，可能與水和維生素等成分有關(guān)。

   光譜測(cè)量結(jié)束后，將葡萄樣品置于－40℃的低溫條件下冷凍保存，待分離葡萄皮、籽，經(jīng)磨粉、超聲處理、離心、上清液提取后，進(jìn)行總酚和單寧含量測(cè)定。

圖6 總酚標(biāo)準(zhǔn)曲線

   總酚是葡萄皮、籽提取物中主要的酚類物質(zhì)，采用Folin－Ciocalteu方法測(cè)定并進(jìn)行適當(dāng)修改。使用沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線（mg /g沒(méi)食子酸當(dāng)量）表征總酚含量。

圖7 丹寧標(biāo)準(zhǔn)曲線

   采用甲基纖維素沉淀法測(cè)定單寧含量，并根據(jù)校準(zhǔn)曲線，以mg /g的兒茶素當(dāng)量表征單寧含量。