?色谱柱活化方法的核心步骤是根据色谱柱类型选择合适的冲洗流程，旨在替换保存液、去除杂质并平衡固定相。?不同色谱柱的活化方法差异显著，需遵循以下分类操作：

一、常见色谱柱活化方法分类说明

1. ?反相色谱柱（如C18柱）?：

• ?第一步?

  ：用纯有机溶剂（甲醇或乙腈）冲洗20-30个柱体积?

• ?第二步?

  ：混合过渡流动相（甲醇/乙腈与水比例50:50）冲洗10个柱体积?

• ?第三步?

  ：用实际分析流动相平衡10-30个柱体积直至压力稳定?

• ?注意事项?

  ：活化过程不宜接入检测器，避免污染?

2. ?正相色谱柱?：

• ?直接使用流动相平衡20-30个柱体积?

  ，无需过渡冲洗?

• ?特殊保存状态?

  ：部分正相柱保存于正己烷或异丙醇，活化时需按出厂说明调整?

3. ?离子交换色谱柱（如SAX、SCX）?：

• ?第一步?

  ：用100%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积?

• ?第二步?

  ：转换为适合离子强度和pH值的流动相平衡?

4. ?特殊功能柱（如氨基柱、氰基柱转为反相使用）?：

• ?预处理?

  ：需用异丙醇或乙醇冲洗50-100个柱体积转换相态

5. ?HILIC模式色谱柱?：

• ?活化流程?

  ：先用50倍柱体积的50%乙腈/水混合液平衡，再用流动相冲洗20柱体积

二、通用活化原则

• ?流速控制?

  ：初始冲洗采用低流速（如0.5-1mL/min），逐步提升至工作流速?

• ?溶剂纯度?

  ：必须使用HPLC级溶剂并提前过滤?

• ?柱体积计算?

  ：标准柱体积约为柱长（cm）× 内径半径2（cm2）× π，可根据具体尺寸换算

三、操作建议

• ?新柱活化前?

  ：建议建立色谱柱性能测试台账，追踪柱压和峰型变化

• ?长期保存后?

  ：需重新活化，避免使用缓冲盐保存

• ?维护扩展?

  ：日常使用可搭配预柱?；?span id="g8oiqosg" class="cos-icon cos-icon-research cosd-markdown-research-icon" style="background-color: rgb(255, 255, 255); color: rgb(0, 0, 0); -webkit-font-smoothing: antialiased; display: inline-block; font-size: 9px; line-height: 9px; margin-top: 0px; position: relative; vertical-align: text-top; margin-left: 1px; font-family: cos-icon !important;">延长分析柱寿命

?关键提示?：活化方法需严格参照色谱柱说明书，厂商建议的柱保存液和pH适用范围是操作基准。?