THP-1基因敲除細胞是通過CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)實現(xiàn)的,用于研究免疫和炎癥相關(guān)機制。借助CRISPR/Cas9技術(shù)及雅吉生物的高效編輯服務(wù),科研人員可更精準地進行基因功能研究和藥物靶點篩選,為免疫疾病與感染治療開辟新思路例如,通過設(shè)計特定的sgRNA序列并將其與Cas9酶結(jié)合,可以實現(xiàn)對THP-1細胞中目標基因的敲除,從而研究基因功能及其在疾病中的作用
研究者可以通過以下步驟構(gòu)建基因敲除細胞:
設(shè)計并驗證sgRNA序列,確保其能夠準確引導Cas9酶切割目標基因。
構(gòu)建表達載體,將sgRNA和Cas9基因克隆到載體中,并通過轉(zhuǎn)染方法導入THP-1細胞
通過篩選和克隆技術(shù)選擇成功敲除目標基因的細胞亞群。
例如,已有研究成功利用CRISPR/Cas9技術(shù)在THP-1細胞中敲除了GPR108基因,并通過PCR和測序驗證了敲除效果
。 此外,還有研究通過類似方法敲除了其他基因(如S100A9、KCNN4等),進一步揭示了THP-1細胞在免疫反應中的作用
THP-1基因敲除細胞為研究免疫調(diào)控、信號通路及疾病模型提供了重要工具
THP-1細胞基因敲除的標準流程(基于慢病毒技術(shù))
在THP-1細胞中實現(xiàn)高效基因敲除,需經(jīng)過以下幾個核心步驟:
1.靶向設(shè)計與載體構(gòu)建:依據(jù)目標基因的關(guān)鍵外顯子區(qū)域設(shè)計sgRNA,并構(gòu)建至慢病毒載體系統(tǒng)中;
2.慢病毒制備與細胞感染:使用HEK293T細胞進行病毒包裝,優(yōu)化感染MOI并借助Polybrene提高感染效率;
3.篩選與單克隆擴增:利用抗生素篩選獲得Cas9穩(wěn)定表達株及sgRNA陽性克隆,并進行單細胞克隆擴增;
4.基因敲除驗證:通過測序、酶切分析及Western blot驗證目標基因的敲除效率,確保純合克隆的獲得。
專業(yè)細胞基因編輯一站式服務(wù)商
高效率編輯:基因敲除效率高達80%,遠超市場平均水平(常規(guī)方法效率10%-30%);
全面服務(wù)體系:涵蓋從sgRNA設(shè)計到敲除驗證的全流程,支持敲除、點突變、敲入等多種定制化需求;
海量成功案例:已建立超過5000種基因編輯細胞株,廣泛應用于炎癥、腫瘤、代謝等多個研究方向;
快速響應交付:常規(guī)項目6周內(nèi)交付,緊急項目可加急處理,助力科研加速。
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