一、莢膜

某些細(xì)菌生活在一定的營養(yǎng)條件下時，會在細(xì)胞壁表面形成一層松散的粘液狀物質(zhì)，稱為莢膜，一般由多糖和多肽組成。莢膜能夠保護(hù)細(xì)胞免遭干燥影響，同時也是細(xì)胞外的碳源和能源的儲備物質(zhì)。當(dāng)環(huán)境缺乏營養(yǎng)時，可被細(xì)胞利用。從臨床方面來講莢膜可以保護(hù)病原菌免遭宿主吞噬細(xì)胞的吞噬，增強(qiáng)其致病能力。如具有莢膜的S 型肺炎球?qū)θ梭w毒力強(qiáng)，能引起肺炎，但如果細(xì)胞失去莢膜(即成為R型菌株)后，致病力就下降。

因莢膜是由細(xì)菌細(xì)胞壁外的一層粘液性多糖類物質(zhì)組成，其對染料的親和力較弱，因此不容易著色，通常采用負(fù)染色法進(jìn)行染色，讓菌體和背景著色，而莢膜不著色，從而使菌體周圍呈現(xiàn)透明圈。

莢膜染色方法：

步：需要制作適當(dāng)厚度的細(xì)菌涂片，涂片時可多挑些菌體與水充分混合，并將粘稠的菌液盡量涂開，但涂布的面積不宜過大，在空氣中自然干燥，不要加熱固定。

第二步：滴加適量的結(jié)晶紫染色液于載玻片上，覆蓋菌體，靜置染色5-7分鐘。

第三步：用20%硫酸銅水溶液沖洗涂片，沖洗要適度，2-3遍即可。

第四步：用吸水紙吸干多余的水分，并立刻滴加1-2滴香柏油，以免形成CuSO4結(jié)晶。

第五步：使用顯微鏡鏡檢觀察。

二、鞭毛

鞭毛是生長在細(xì)菌菌體表面的細(xì)長、彎曲的，具有運(yùn)動功能的蛋白質(zhì)附屬物。鞭毛的數(shù)目大約有一至數(shù)十條，長度約為15-20μｍ，直徑為0.01-0.02μｍ。鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動器官，觀察細(xì)菌鞭毛對于細(xì)菌鑒定有十分重要的意義。依據(jù)鞭毛的有無、位置和數(shù)量，細(xì)菌分為無鞭毛菌、單端極鞭毛菌、單端雙鞭毛菌、單端叢鞭毛菌、周鞭毛菌、側(cè)鞭毛菌等。

一般情況下，因鞭毛較細(xì)，在光學(xué)顯微鏡下不易觀察，通常需使用電鏡進(jìn)行觀察，但通過特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困難。

鞭毛染色方法：

步：挑選活力較強(qiáng)的幼齡細(xì)菌進(jìn)行涂片，挑取菌的時候盡量不要帶有培養(yǎng)基，涂片的玻片必須清洗干凈，染色前可用洗衣粉洗凈并在酒精中浸泡24h，用前擦拭干凈后使用。

第二步：將菌落輕點(diǎn)在玻片上，傾斜玻片讓菌液自然留下，不要用接種環(huán)涂抹或用力過猛，以免破壞鞭毛。

第三步：靜置待其自然干燥。

第四步：滴加鞭毛染色液 2-3滴，在室溫中染色10分鐘。

第五步：直接用蒸餾水緩慢沖洗染液，不要先傾去染液后再水洗，以免污染背景不易觀察，沖洗時要將染液的顏色沖洗干凈否則也會影響觀察。

第六步：使用顯微鏡鏡檢觀察。鏡檢時先從邊緣開始逐漸向中間鏡檢，因?yàn)檫吘壧幘啃?，易觀察到單菌落，中心處菌易重疊，不易觀察。

三、芽孢

芽胞是芽胞桿菌休眠期的一種特殊形態(tài)。芽胞的形態(tài)包括芽胞形狀、芽胞位置和胞子囊膨大，芽胞形態(tài)分為圓柱形、橢圓形、球形，芽胞位置分為端生、近端生、中生或近中生。具有非常強(qiáng)勁的抗熱、抗化學(xué)藥物、抗輻射性能。根據(jù)芽胞的形態(tài)學(xué)可以對芽胞桿菌屬和梭菌屬進(jìn)行初步鑒定。

芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難。因此，用著色力強(qiáng)的染色劑(如孔雀石綠)在加熱條件下進(jìn)行染色時，染料不僅可以進(jìn)入菌體，而且也可以進(jìn)入芽孢，進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進(jìn)入芽孢的染色的染料則難以透出，若再用復(fù)染液(如沙黃水溶液)染色后，芽孢仍然保留初染劑的顏色，而菌體被染成復(fù)染劑的顏色，即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易于區(qū)分。

芽孢染色方法：

步：常規(guī)涂片，待干燥后，通過火焰上方3次，進(jìn)行固定。

第二步：滴加3-4滴孔雀石綠水溶液于涂片上。

第三步：用木夾夾住載玻片在火焰上持續(xù)加熱6-8s，使染液冒蒸汽但不沸騰。

第四步：待玻片冷卻后，傾去染液，水洗至不再褪色為止。

第五步：用番紅溶液復(fù)染1min，水洗至水為無色。

第六步：待其干燥后，使用顯微鏡鏡檢觀察。

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