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支原體污染:實(shí)驗(yàn)室的隱形威脅與翌圣生物的解決方案

來(lái)源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2025年05月12日 08:25  
在生命科學(xué)研究和生物制藥領(lǐng)域,細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)成功的基石。然而,一種肉眼不可見(jiàn)的“隱形殺手”——支原體(Mycoplasma),卻可能悄無(wú)聲息地污染細(xì)胞,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果失真甚至失敗。支原體是目前已知最小、最簡(jiǎn)易的原核生物,無(wú)細(xì)胞壁的特性使其難以被常規(guī)抗生素殺滅。它們通過(guò)黏附宿主細(xì)胞表面,竊取營(yíng)養(yǎng)并釋放毒素,雖不直接致死細(xì)胞,卻會(huì)嚴(yán)重干擾代謝過(guò)程,保守估計(jì)全球15%-35%的細(xì)胞培養(yǎng)存在支原體污染風(fēng)險(xiǎn)。如何高效預(yù)防與清除支原體,成為實(shí)驗(yàn)室亟需解決的難題。


 

 
支原體背景信息
 
 

定 義

支原體(Mycoplasma)又稱(chēng)霉形體,是目前發(fā)現(xiàn)的最小、簡(jiǎn)單的無(wú)細(xì)胞壁的原核生物,直徑大小0.1~0.3μm,該大小剛好介于細(xì)菌和病毒之間。其能通過(guò)濾膜且呈高度多形性,是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中相對(duì)常見(jiàn)且難以檢測(cè)的污染物。由于能形成絲狀與分枝形狀,故稱(chēng)為支原體。

 

分 類(lèi)

支原體(mycoplasma)是細(xì)菌中最小的一種微生物,在生物學(xué)分類(lèi)中屬于柔膜菌門(mén)、柔膜菌綱,又分屬于不同目科屬。其中研究較多的支原體目、支原體科,主要包含支原體屬、脲原體屬兩個(gè)種屬。

圖1.支原體結(jié)構(gòu)圖

 

常見(jiàn)形態(tài)

支原體有多種形態(tài),有球形、桿形、絲狀、分支狀等,通常可以在掃描電鏡和透射電鏡下進(jìn)行觀察。細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞膜是比較適宜支原體生長(zhǎng)的;寄生在細(xì)胞表面的支原體可以穿透宿主細(xì)胞膜。

 

圖2.支原體形態(tài)圖

 

 
支原體污染的來(lái)源和常見(jiàn)種類(lèi)
 
 

污染的來(lái)源

主要為細(xì)胞培養(yǎng)液或其成分(如培養(yǎng)基原料、血清和其他試劑)、實(shí)驗(yàn)室操作人員、細(xì)胞培養(yǎng)箱、液氮培養(yǎng)箱、空氣中的粒子和氣溶膠、抗生素的過(guò)度使用、密封不當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)物和污染了支原體的細(xì)胞等。

 

圖3.易受支原體污染的來(lái)源

 

常見(jiàn)的污染支原體種類(lèi)

細(xì)胞培養(yǎng)中95%的支原體污染主要是由萊氏無(wú)膽甾原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、口腔支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體這6種常見(jiàn)支原體引起的。

 

表1.污染支原體種類(lèi)

S/N

支原體

主要來(lái)源

95%常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)污染物

1

Acholeplasma laidlawii 萊氏無(wú)膽甾原體

豬、牛、禽類(lèi)、植物

2

Mycoplasma arginini 精氨酸支原體

豬、牛、綿羊、山羊

3

Mycoplasma hyorhinis 豬鼻支原體

4

Mycoplasma orale 口腔支原體

5

Mycoplasma fermentans 發(fā)酵支原體

6

Mycoplasma hominis* 人型支原體

7

mycoplasma pneumoniae 肺炎支原體

\

8

Mycoplasma salivarium 唾液支原體

\

9

Mycoplasma bovis* 牛支原體

\

10

Mycoplasma gallisepticum 雞毒支原體

禽類(lèi)

\

11

Mycoplasma synoviae 滑液囊支原體

禽類(lèi)

\

12

Spiroplasma citri 螺原體

植物

\

 

 
支原體污染方式和影響
 
 

污染的方式

支原體一般通過(guò)黏附在宿主上皮細(xì)胞表面,從而成為人類(lèi)、動(dòng)物和植物的寄生物,通過(guò)攝取宿主細(xì)胞的膽固醇等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和/或代謝產(chǎn)生的毒素、過(guò)氧化氫等有毒物質(zhì)危害人類(lèi)和動(dòng)植物,給細(xì)胞制劑和科研工作帶來(lái)負(fù)面影響。

 

污染的影響

保守估計(jì)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率為15~35%,支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)代謝或生化合成過(guò)程造成影響,雖不會(huì)明顯表現(xiàn)為造成細(xì)胞死亡,但卻會(huì)嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。

 

圖4 支原體污染的危害

 

 
支原體污染,從預(yù)防到清除的關(guān)鍵策略
 
01
 
 

預(yù)防先行

切斷污染源頭

  • 嚴(yán)格檢測(cè)新引入細(xì)胞:所有新細(xì)胞株或原代分離細(xì)胞需通過(guò)支原體檢測(cè)(如qPCR或LAMP法),確保陰性后方可進(jìn)入培養(yǎng)體系。

  • 規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作:穿戴專(zhuān)用防護(hù)裝備,定期消毒超凈臺(tái)、移液器等設(shè)備,避免交叉污染。

  • 環(huán)境管控:細(xì)胞房每周紫外線消毒,每月全面清潔并配合支原體預(yù)防試劑擦拭死角,維持無(wú)菌環(huán)境。

 

02
 
 

精準(zhǔn)清除

高效去除污染

支原體去除試劑-MycAwayTM 支原體去除試劑(1000×)40607ES通過(guò)靶向支原體DNA快速起效,3天即可顯著改善污染。其低毒性設(shè)計(jì)不損傷宿主細(xì)胞,且操作簡(jiǎn)便,僅需加入培養(yǎng)基孵育,廣譜覆蓋95%以上常見(jiàn)支原體類(lèi)型(如豬鼻支原體、口腔支原體等)。產(chǎn)品特點(diǎn)如下:

 

  • 去除顯著

支原體污染的細(xì)胞中,加入翌圣MycAway™ 支原體去除試劑(1000×),連續(xù)培養(yǎng)1周后,培養(yǎng)基顏色明顯緩解(支原體污染的細(xì)胞,培養(yǎng)基約1天就會(huì)變黃,)顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài),結(jié)果顯示細(xì)胞狀態(tài)明顯改善,細(xì)胞倍增時(shí)間恢復(fù)。

 

圖5.支原體去除前后細(xì)胞狀態(tài)比較

 

  • 毒性低

針對(duì)無(wú)支原體污染的細(xì)胞,同時(shí)使用MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑及PBS處理細(xì)胞,24h后,分別使用CCK-8和細(xì)胞計(jì)數(shù)的方式對(duì)細(xì)胞活力和增殖進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)顯著抑制作用,毒性低。

 

圖6.MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑細(xì)胞毒性測(cè)試結(jié)果

 

03
 
 

翌圣生物

支原體防控的全周期保障

為了構(gòu)建支原體污染的全周期防控體系,翌圣生物科技以創(chuàng)新技術(shù)為核心,開(kāi)發(fā)了覆蓋“檢測(cè)-清除-預(yù)防”三大維度的完整產(chǎn)品矩陣,為實(shí)驗(yàn)室提供一站式解決方案

  • 精準(zhǔn)檢測(cè):支原體qPCR檢測(cè)試劑盒、LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑盒等,支持快速篩查與藥典級(jí)檢測(cè),靈敏度達(dá)10 CFU/mL,滿(mǎn)足細(xì)胞治療產(chǎn)品快速放行需求。

  • 靶向清除:MycAway™支原體去除試劑(細(xì)胞用)及環(huán)境專(zhuān)用消殺試劑,廣譜覆蓋95%以上污染支原體,3天高效起效,兼顧細(xì)胞安全性與操作便捷性。

  • 長(zhǎng)效防護(hù):支原體預(yù)防試劑結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)化操作流程,從新細(xì)胞準(zhǔn)入、實(shí)驗(yàn)環(huán)境管控到設(shè)備定期消殺,多節(jié)點(diǎn)阻斷污染傳播鏈。

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產(chǎn)品清單
 

產(chǎn)品應(yīng)用

產(chǎn)品名稱(chēng)

貨號(hào)

規(guī)格

支原體去除

MycAway™Treatment(1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent(支原體去除試劑)

40607ES

100 μL/ 1mL / 5×1mL

支原體預(yù)防

MycAway™ Spray(Ready-to-use) 支原體噴霧劑(即用型)

40605ES

500mL / 2×500mL / 10×500mL

MycAway 支原體預(yù)防試劑(2000×)細(xì)胞生物學(xué) 分離培養(yǎng)

40608ES

1mL / 5×1mL

MycGuard™-1 Solution(100×),for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤(pán)1號(hào)消毒衛(wèi)士(支原體污染預(yù)防)

40609ES

100 mL

MycGuard™-2 Solution(500×),for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴鍋2號(hào)消毒衛(wèi)士(支原體污染預(yù)防)

40610ES

100 mL

支原體檢測(cè)

(一步法快檢)

MycAway™Plus-Color One - Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測(cè)試劑盒

40612ES

25T / 100T

支原體檢測(cè)

PCR)

GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測(cè)試劑盒

40601ES

10 assays/20 assays

支原體檢測(cè)(qPCR)

Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)ǎ?/span>

40618ES

25T / 100T

MycAway® Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit(2G) 支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)ǎ?2G)

40619ES

25T / 100T



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