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氨基酸( AA)含量檢測試劑盒（微量法）

來源：上海尚寶生物科技有限公司 2025年04月27日 11:19

氨基酸( AA)含量檢測試劑盒（微量法）

產品貨號：BA1044

產品規(guī)格：100管/96樣

產品內容：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入1.33mL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入18.67 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1支，10mg半胱氨酸，4℃保存。臨用前加入8.26mL蒸餾水，得到10μmol/mL的半胱氨酸標準溶液備用。

產品說明：

動物肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官，故尿中氨基酸的變化最能反應肝、腎的生理狀態(tài)。另外，氨基酸還能反應灼傷、傷寒等方面情況。植物體內氨基酸含量對研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時期氮代謝變化、植物對氮素的吸收、運輸、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應，產生藍紫色化合物，在570 nm有特征吸收峰；通過測定570nm吸光度，來計算氨基酸含量。

需自備的儀器和用品：

臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、無水乙醇、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品的提?。?/span>

(1) 組織樣本：稱取約0.1g組織，加試劑一1mL，室溫下充分研磨，轉移到1.5mLEP管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15min；自來水冷卻后，10000rpm，4℃離心10min，取上清液，待測。

(2) 細菌或細胞樣本：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000rpm，4℃離心10min，取上清液，待測。

二、測定步驟：

1、分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至570nm，蒸餾水調零。

2、操作表：（在EP管中進行）

試劑名稱（μL）	測定管	標準管	空白管
樣本	10	-	-
標準液	-	10	-
蒸餾水	-	-	10
試劑二	100	100	100
試劑三	100	100	100
試劑四	10	10	10
混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15min，冷卻后反復顛倒EP管數(shù)次， 8000rpm 離心5min后取上清，于570nm測定吸光值，分別記為A測定管、A標準管、A空白管，并計算ΔA測定管=A測定管-A空白管，ΔA標準管=A標準管-A空白管，顯色后務必在30min內測完。

三：氨基酸含量計算：

（1）按樣本質量計算

氨基酸含量（μmol /g 鮮重）=（C標準品×V標準品×ΔA測定管÷ΔA標準管）÷（W÷V樣總×V樣）

=10×ΔA測定管÷ΔA標準管÷W

（2）按蛋白濃度計算

氨基酸含量（μmol /mg prot）=（C標準品×V標準品×ΔA測定管÷ΔA標準管）÷（Cpr×V樣）

=10×ΔA測定管÷ΔA標準管÷Cpr

（3）按細菌或細胞數(shù)量計算

氨基酸含量 (μmol/10⁴cell) =(C標準品×V標準品×ΔA測定管÷ΔA標準管)÷（500×V樣÷V樣總）

=0.02×ΔA測定管÷ΔA標準管

（4）按液體體積計算

氨基酸含量（μmol/mL）=（C標準品×ΔA測定管÷ΔA標準管）×2=20×ΔA測定管÷ΔA標準管

C標準品：標準品濃度，10μmol/mL；V標準品：反應體系中加入標準品體積，0.01mL；W：樣品鮮重，g；V樣：反應體系中加入樣品體積，0.01mL；V樣總：樣品提取液總體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬個；2：提取液體時的稀釋倍數(shù)，（V液體+V試劑一）/V液體=2。

注意事項：

1、試劑盒中試劑三和試劑四均需臨用前配制，且避光保存。

2、為保證實驗結果的準確性，需先取1-2個樣做預實驗。

3、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。

4、如果樣本吸光值大于0.78，建議將樣本用試劑一稀釋后進行測定。

5、因提取過程中會使蛋白變性，若使用蛋白濃度計算時需用PBS單獨提取后再測定。