手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
在生物制药领域，核糖核酸（RNA）的质量控制至关重要，直接关系到基因表达研究的可靠性和药物制造的安全性。传统RNA纯度评估通常依赖于 260nm 和 280nm 的吸光度比值测量。然而，这种方法存在局限性，因为RNA样本缓冲液的 pH 值和离子强度变化会影响 A260/280 比值，进而影响纯度评估的准确性。
聚焦以上挑战，Agilent 的研究团队精心设计一系列实验，深入探讨了这些因素对 RNA 纯度评估的影响，并据此提出了改进方法。本研究使用 Agilent Cary 3500 Multicell Peltier UV-Vis 分光光度计进行实验，并借助 Agilent Cary UV Workstation 软件完成数据采集。
实验包括三个部分：
1
研究 pH 值和 Na2HPO4 浓度对 RNA 的 A260/280 比值和吸收度的影响。
2
研究 pH 值和离子强度对 RNA 中溶解的 BSA 蛋白的 A260/280 比值的影响。
3
对 HeLa RNA 在 1 mM Na2HPO4、TNE 缓冲液和水中的 UV 吸收扫描分析。
图 1. pH 值和 Na2HPO4 的浓度在（A）A260/280 比率和 （B）吸光度上的影响。（C）260 nm 和 280 nm 处吸光度的百分比变化
实验数据显示，随着 RNA 样本缓冲液 pH 值和 Na2HPO4 浓度的增加，A260/280 比值显著上升，尤其是在 pH 值 7.2 至 8.6 和 Na2HPO4 浓度 0.02 至 1 mM 的区间内，其增长尤为明显。这一发现表明，通过精确控制缓冲液的pH值和离子强度，可以更准确地评估 RNA 的纯度。
图 2. 在蛋白质存在或不存在的情况下，pH 值和离子强度对 RNA A260/280 比率的影响。（A） 在 10 mM Na2HPO4 中分别加入 RNA、蛋白质和 RNA 加标蛋白质的吸光度曲线（B） RNA、蛋白质和 RNA 加标蛋白质分别在 0.01 至 10 mM Na2HPO4 中的 A260/280 比率图
可观察到，在 10 mM Na2HPO4 中加入蛋白质前后，RNA 的 A260/280 比值从 2.15 降至 1.61，表明蛋白质改变了 RNA 的吸收度。且在水和 1.0 mM Na2HPO4 中，RNA与蛋白质的 A260/280 比值分别下降了 19.1% 和 26.6%，表明在碱性条件下 RNA 样本中蛋白质污染的检测灵敏度显著提高，这对于确保 RNA 样本保持高质量具有重要意义。
图 3. 在水、TNE 缓冲液和 1 mM Na2HPO4 中测试 HeLa RNA 的吸光度曲线
1 mM Na2HPO4 和 TNE 缓冲液中的 RNA 吸收光谱相似，而水中的 RNA 光谱则向更高波长移动。建议使用碱性缓冲液溶解提取的 RNA。
图 4. Agilent Cary 3500 Multicell Peltier UV-Vis 分光光光度计硬件与软件设置（内置算法）
Agilent Cary 3500 Multicell Peltier UV-Vis 分光光度计在相关研究中发挥了关键作用。该设备设计创新，包括具备八个比色皿位置，极大地提高了测量效率。其可同时测量多个样本的能力避免了遭受实验变量干扰，增强了结果的可靠性。
此外，Cary 3500 的内置方程软件功能能够自动计算 A260/280 比值，进一步提高了分析的吞吐量。该设备的软件与 Agilent OpenLab 软件套件兼容，能有效确保数据的安全获取和存储，符合 FDA 21 CFR Part 11、EU Annex 11 以及其他国家类似的法规要求。这使得 Agilent Cary 3500 分光光度计成为受监管环境中 RNA 质量控制的理想选择。
通过深入探索与技术创新，Agilent 研究团队成功破局难题，为科研人员提供了更为精准、高效率的 RNA 纯度评估手段，确保 RNA 质量控制全流程坚实可靠。更多精彩详情与生物制药领域深度研究，将持续为您放送。
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
采购中心