土壤硝態(tài)氮試劑盒說明書

微量法 100T/96S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

硝態(tài)氮是指硝suan鹽中所含有的氮元素，土壤中的有機物分解生成銨鹽，被氧化后變?yōu)橄鯌B(tài)氮。土壤中硝態(tài)氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接關系到作物的產(chǎn)量與品質(zhì)。

測定原理：

在濃酸條件下，NO^3-與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算得硝態(tài)氮含量。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×2 支，4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每支加 1ml 濃硫酸充分溶解。

自備儀器和用品：

蒸餾水、天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、振蕩儀。

樣本處理：

按照土壤質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 新鮮土樣，加入 1mL 蒸餾水）加入蒸餾水，置于振蕩儀中振蕩提取 1h，25℃，10000g 離心 10min，取上清待測。

測定操作表：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 410nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表（于EP 管中加入下列試劑）：

混勻，渦旋振蕩，使出現(xiàn)的沉淀充分溶解，轉(zhuǎn)移 200uL 至微量石英比色皿/96 孔板中測定 410nm 處吸光值A，△A=A 測定管-A 空白管。

計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0156x+0.0073，R²=0.9997

NO3—— N 含量（mg/kg 鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V 樣總） =64.1×（△A-0.0073）÷W V 樣總：加入提取液體積，1ml，W：樣本質(zhì)量，g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0078x+0.0073，R²=0.9997

NO3—— N（mg/kg 鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V 樣總）=128.2×（△A-0.0073）÷W V 樣總：加入提取液體積，1ml，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

1、硝酸根不為土壤膠體吸附，且易溶于水，很容易在土壤內(nèi)部移動，所以測定此指標時應注意采樣深度一致。

2、土壤經(jīng)風干或者烘干很容易引起 NO3—— N 的變化，所以最好采用新鮮土壤進行測定，以準確反映該指標含量。

3、試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。

4、試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護措施。

5、*低檢出限為 100μg/kg。