所谓Real-Time PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。real-time PCR技术即实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物监测定量产生的偏差,提高实验的重复性。该技术已经被广泛用于监测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果。
Real-Time PCR操作流程
Real-Time PCR操作流程
- 根据已知全长基因序列及待检基因的背景信息,设计并合成Realtime PCR引物
- RNA抽提:提供组织、细胞等来源样本的RNA抽提服务,并将RNA反转录为cDNA
- 制备标准曲线样品
- 标准曲线样品和待测样品分别加入到含SG的RealTime PCR反应液中,进行RealTime PCR扩增和检测
- 检测结果进行标准曲线分析
- 提供实验报告:包括详细的实验方法及实时荧光定量PCR实验结果的相关图表。
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