1、为什么MACS磁珠分选要使用分选柱？

• 磁珠可以更?。好捞祆淮胖橹本吨挥?0nm，普通真核细胞直径一般大于10um，结合在细胞上的磁珠大小可以忽略不计，因此：1、携带的磁珠不影响细胞大小——可以直接上流式检测，不影响FSC数据收集；2、细胞功能不受影响——分选过程中，磁珠的结合不会引起细胞的活化及其它生理状态的改变，可以保持细胞的原始生理和功能状态，尤其在Naive免疫细胞的分选中尤为重要。

• 抗原表位的占据更少：因为磁场可以被分选柱放大1000-10000倍，所以不需要太多的磁珠结合即可分离不同细胞。约20%-30%的抗原表位被偶联了磁珠的抗体结合即可将细胞滞留在磁场中，这就为后续实验预留了足够的抗原表位，因此，对于表达水平不低的抗原来说，MACS磁珠分选后的细胞可以直接进行相关荧光抗体标记，进而进行流式检测。

• 细胞活力更好：通过分选柱引起的间接磁场放大，使得细胞在磁场中所承受的直接压力小，让细胞受力均匀；同时，通过分选柱放大的磁场可以瞬时变大、离开磁场后磁力又瞬间消失，这些都保证了细胞所受机械力小，损伤小，得到的细胞活力高。

• 细胞纯度更高：通过去除分选柱，可以更好的进行去除分选，提高目的细胞的纯度。

2、是不是所有细胞都要从分选柱上重新获取？

不是。

若使用阳性分选策略，目的细胞是磁性标记的，在分选器和分选柱产生的磁场中滞留后，当分选柱移出分选器，磁场瞬间消失，此时用活塞用力将分选柱中滞留的细胞推出，从而收集到目的细胞；

反之，若使用去除分选策略，此时目的细胞是非磁性标记的，可直接从洗脱液中获得。

3、MACS分选柱有哪几种，如何选择合适的分选柱？

MACS分选柱根据其细胞容量、用途可以分为几种：

MS、LS、LD、大细胞分选柱、全血分选柱、autoMACS分选柱以及用于生物大分子分离的u柱等，选择分选柱时要根据您的实验目的、实验策略和注重的实验效果来取舍，我们在之前的一期微信“如何选择恰当的分选柱”中有详细的说明。

4、MACS分选柱能否重复使用？

普通的MACS分选柱不建议重复使用，但autoMACS分选柱分可以重复使用。

重复使用不能保证无菌，MACS分选柱都是独立、无菌包装的，保证分选下来的细胞无污染；

分选柱内填充了经亲水包被层处理的铁珠，如果通过浸泡、洗涤等过程重复使用，那么，铁珠表面得亲水层被破坏，裸露的铁珠与细胞接触会对流经的细胞产生损失，影响细胞活力和分选效果。

5、那为什么autoMACS分选柱可以重复使用呢？

autoMACS分选柱可以在两周之内使用，且最多用100次。

autoMACS分选柱一旦安装到全自动分选仪上，须保存在液体中，防止分选柱中的填充基质被氧化无法使用。

每次使用后应该按照推荐程序进行冲洗和消毒，以便更好的保存和下一次使用。

6、全血分选柱与普通分选柱有何不同？

全血分选柱有两层特殊的基质，非磁性层和磁性层；普通细胞分选柱中填充的是均一的亲水包被层处理的铁珠；

全血分选柱柱容量为15ml的全血；

全血分选柱可用于直接从全血中分选细胞，无需进行红细胞裂解或者密度梯度离心的过程，无需先制备PBMC。