圖1。集群藻類(微囊藻)和絲狀藻類(Anabaena)可以使用FlowCam及其分析軟件VisualSpreadsheet^®枚舉。每張圖片下方標(biāo)注菌落面積(ABD) (μm²)。

樣品采集與制備

以下節(jié)選自Lehman et al.(2017)，《2014年嚴(yán)重干旱對(duì)舊金山河口微囊藻爆發(fā)的影響》，《有害藻類63:94-1208》，描述了他們樣品的收集和制備。

用Lugol溶液保存所要測(cè)定生物體積的微囊藻的兩個(gè)樣品(>75 μm粒徑)。微囊菌落的生物體積是使用FlowCam數(shù)字成像流式細(xì)胞儀(Fluid imaging Technologies；Sieracki et al.，1998)檢測(cè)獲得Area (ABD)。為了更方便地測(cè)量集群藻的生物體積，將樣品分成直徑<300>300μm樣品在2倍放大下分析?；贔lowCam測(cè)量的細(xì)胞豐度結(jié)果與顯微分析的結(jié)果密切相關(guān)(r=0.88,p<0.01)。

采用0.3m深度的全水(未處理)樣品，測(cè)定了次地表水中浮游植物和藍(lán)藻的生物體積和分類組成(>10 μm粒徑分?jǐn)?shù))。這些樣本保存在4℃，并在FlowCam數(shù)字成像流式細(xì)胞儀上保存1到3小時(shí)。FlowCam安裝了一個(gè)熒光觸發(fā)器，可以從碎屑中分離活的浮游植物(Sieracki et al.，1998)。將樣品置于100 mL在10分鐘內(nèi)通過(guò)流通池中，采用10倍放大1，以此獲得細(xì)胞的數(shù)字圖像。

計(jì)算細(xì)胞密度：集群藻類

Lehman等人使用以下方法計(jì)算了含有集群微囊藻樣品的細(xì)胞密度(細(xì)胞/mL)。

首先，測(cè)定微囊藻菌落中單個(gè)細(xì)胞的平均面積。從VisualSpreadsheet列表文件中選擇集群(圖2)，用VisualSpreadsheet計(jì)算菌落的面積(Area, ABD)除以圖像中人工計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)(圖2)。

圖2。微囊藻集群在VisualSpreadsheet軟件中顯示的圖像。圖下標(biāo)注了每個(gè)集群的面積(ABD) (μm²)。下面的計(jì)算中使用了綠色突出顯示的菌落圖像。人工計(jì)數(shù)顯示，每個(gè)高亮集群從左到右分別有4、6、13和28個(gè)微囊細(xì)胞。

在列表(LST)文件中分離出微囊藻后，將該文件導(dǎo)出至Excel，作為分類總結(jié)報(bào)告。在Excel單元格中輸入以下公式，計(jì)算樣本的平均細(xì)胞密度:

計(jì)算細(xì)胞密度：絲狀藻類

計(jì)算集群藻細(xì)胞密度的方法也可用于計(jì)算絲狀藍(lán)藻(包括魚(yú)腥藻的細(xì)胞密度。

為了確定單個(gè)細(xì)胞的面積(ABD)，將魚(yú)腥藻絲的面積(ABD)除以圖像中細(xì)胞的數(shù)量。

利用VisualSpreadsheet文件中的圖像(圖3)，確定Anabaena細(xì)胞的平均面積(ABD)為48 μm²。

在VisualSpreadsheet列表(LST)文件中篩分出魚(yú)腥藻之后，數(shù)據(jù)被導(dǎo)出到Excel中，作為分類總結(jié)報(bào)告。將如下公式輸入到Excel細(xì)胞中，計(jì)算絲狀藻樣本的細(xì)胞密度:

細(xì)胞豐度被用來(lái)追蹤藻華生長(zhǎng)。使用上述方法，F(xiàn)lowCam可以用來(lái)計(jì)算集群或絲狀藍(lán)藻藻華的細(xì)胞豐度。