WB蛋白质印迹实验(Western Blot, WB)样本采集流程

一般为了提取到足够的蛋白以及更容易地提取蛋白，需要准备足够量的样本，要求样本量为细胞>10°个，组织>30mg，菌体湿重>10mg,植物>100mg，血清>50uL。蛋白提取的原则:低温快速，裂解充分。细胞样本；一般样本为1×10° ~1×10个细胞

蛋白质印迹(Western Blot, WB)）又称为免疫印迹(Immunoblot)，是利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)将样品中分子量大小不同的蛋白分开，然后通过电转移的方法将凝胶中的蛋白定量地迁移并几乎原位复制、固定到固相膜上，再利用抗原、抗体的特异性结合反应，特殊的抗体标记技术以及相应的检测方法，进而对目的蛋白进行定性、相对定量检测的技术。WB实验流程分为样本采集，蛋白样品制备，上样，凝胶电泳，转膜，封闭，一抗孵育，洗膜，二抗孵育，洗膜，显色(信号检测)。一般为了提取到足够的蛋白以及更容易地提取蛋白，需要准备足够量的样本，要求样本量为细胞>10°个，组织>30mg，菌体湿重>10mg,植物>100mg，血清>50uL。蛋白提取的原则:低温快速，裂解充分。细胞样本；一般样本为1×10° ~1×10个细胞，根据细胞量多少或不同细胞中蛋白含量的多少所加裂解液的量也不相同，一般1×10°个细胞，加裂解缓冲液100~200uL，具体实验操作时参照以上比例，可进行适当调整。