（蒸馏后4-氨基安替比林分光光度法）

一、仪器：

智能一体化蒸馏仪；

分光光度计；

比色皿（1cm）；

梨形分液漏斗（500ml）;

容量瓶（250ml）;

量筒（250ml;50ml）;

脱脂棉；

吸耳球；

二、试剂： 0.1%甲基橙指示剂；

10%硫酸铜溶液；

8%磷酸溶液；

2% 4-氨基安替比林溶液；

8%铁氰化钾溶液；

20%铵-氯化铵缓冲液；

三、步骤：

1、水样预蒸馏：取水样250ml置于蒸馏瓶中，加4滴甲基橙指示剂（为调色用），再加入3ml硫酸铜溶液，用磷酸溶液调节PH值为4（溶液呈橙红色），zui后加入25ml蒸馏水，然后连接冷凝器加热蒸馏（无须外接冷凝器，设备自带密闭式冷凝水循环回流，节能降耗），用250ml容量瓶做接收，接收到250ml标线为止（该装置可自动侦测终点，无须人工值守）。
2、将馏出液移到梨形分液漏斗中，加入2ml铵-氯化铵缓冲液，再加入1.5ml4-氨基安替比林溶液，zui后加1.5ml铁氰化钾溶液（注：若颜色较深，则需稀释，稀释倍数可依据颜色深浅而定。）充分混匀后，准确加入10ml三氯甲烷，盖上盖塞，用力摇120下（10；10；30；35；35），不断放气，静置分层。用脱脂棉擦拭梨形分液漏斗管内壁，将管内壁塞入一小撮脱脂棉，zui后用比色皿接取经脱脂棉滤出的分层液，用分光光度计于460nm波长处进行比色，用三氯甲烷做参比，测量其吸光度。同时做空白试验。

3、计算：

      Y=（0.0185X+0.0372）/250×稀释倍数

式中：Y=水样吸光度－空白吸光度

四、试剂配制：

   1、0.1%甲基橙指示剂：称取0.1g甲基橙稀释至100ml蒸馏水中，*溶解后过滤。

2、10%硫酸铜溶液：称取100g硫酸铜溶于水中，稀释至1000ml,混匀。

3、8%磷酸溶液：量取100ml85%磷酸用水稀释至1000ml，混匀。

4、2%4-氨基安替比林溶液：称取2g4-氨基安替比林溶于100ml水中，混匀。

5、8%铁氰化钾溶液：称取8g铁氰化钾溶于100ml水中，混匀。

6、20%铵-氯化铵缓冲液：称取20g氯化铵，溶于100ml氨水中，混匀。

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