夾心ELISA（Sandwich ELISA）總體上可以分為兩種：直接夾心ELISA和間接夾心ELISA。 
    直接夾心ELISA：直接夾心ELISA又分為雙抗夾心ELISA和雙抗原夾心ELISA。
    雙抗夾心ELISA的方法是：將種抗體（捕獲抗體）包被在固相載體上，封閉后加入待檢抗原，溫育后加入第二種抗體（檢測(cè)抗體），捕獲抗體和檢測(cè)抗體可以是針對(duì)不同表位的兩種單抗，也可以是針對(duì)同一抗原的一種單抗與一種多抗，但是檢測(cè)抗體需要經(jīng)過(guò)酶標(biāo)。
    雙抗原夾心ELISA的原理和操作與雙抗夾心基本相同，不同的是包被的是抗原，待檢對(duì)象是抗體，然后加入酶標(biāo)抗原，再加底物顯色。直接夾心ELISA的原理對(duì)于雙抗夾心ELISA，待檢對(duì)象必須包括兩個(gè)或者兩個(gè)以上的表位，否則檢測(cè)抗體無(wú)法與待檢抗原結(jié)合，例如半抗原和小分子抗原都是不能用雙抗夾心ELISA檢測(cè)的。
    對(duì)于雙抗原夾心ELISA，其操作與間接ELISA基本相同，但利用特異性的抗原代替酶標(biāo)二抗，所以特異性比間接法更好。另外，由于間接ELISA中使用的二抗一般只能識(shí)別IgG，而雙抗原夾心ELISA中任何類(lèi)似的免疫球蛋白都可以被檢測(cè)出，因此雙抗原夾心ELISA比間接ELISA也更靈敏。 
    間接夾心ELISA：間接夾心ELISA是基于兩種不同種屬來(lái)源的抗體的夾心ELISA，其原理是將一種種屬來(lái)源的特異性抗體包被于固相載體上（作為捕獲抗體），封閉，加入待檢抗原，溫育，洗滌后加入另一種種屬來(lái)源的特異性抗體（非酶標(biāo)，作為檢測(cè)抗體），后加入酶標(biāo)二抗（特異性識(shí)別檢測(cè)抗體），再加底物顯色。 與直接雙抗夾心ELISA相比，間接夾心ELISA中引入了特異性識(shí)別檢測(cè)抗體的酶標(biāo)二抗，相當(dāng)于整個(gè)體系的信號(hào)增加了一步放大系統(tǒng)，于是終的結(jié)果比直接雙抗夾心ELISA更靈敏。同時(shí)，由于間接夾心ELISA中的酶標(biāo)二抗僅能識(shí)別檢測(cè)抗體，而不能識(shí)別捕獲抗體，所以體系的特異性也得到了保障。值得提出的是，間接夾心ELISA并不是嚴(yán)格要求捕獲抗體與檢測(cè)抗體來(lái)源于同一物種，也可以是這種情形：僅用特異性的抗體的Fab片段包被固相載體作為捕獲抗體，而用未經(jīng)處理的同種屬來(lái)源的特異性抗體作為檢測(cè)抗體，酶標(biāo)二抗選用只針對(duì)檢測(cè)抗體的Fc段的二抗，這樣的酶標(biāo)二抗同樣不能識(shí)別捕獲抗體，從而使這種體系里的捕獲抗體與檢測(cè)抗體起到類(lèi)似于不同種屬來(lái)源的效果。間接夾心ELISA涉及的體系比較復(fù)雜，用到的試劑也比其它的ELISA復(fù)雜，但是其檢測(cè)靈敏度上的*性使它在檢測(cè)那些低豐度抗原的樣品中應(yīng)用得十分廣泛。