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INS-1 cell 的细胞培养

来源:上海子实生物科技有限公司   2017年06月26日 12:10  

INS-1细胞还是比较好长的,培养条件是RPMI1640+0.11g/L L-Glutamine +0.11g/L 丙酮酸钠+5.6 MMOL/L 葡萄糖+ 50umol/L 2 –mercaptoethanol + 10%FBS ,细胞本身就是成片生长的,细胞对胰酶比较敏感,如果消化不好,细胞状态会受到很大的影响,甚至会不贴壁死亡,我一般用0.05%胰酶-EDTA消化半分钟就好了

1000mmol=1mol=质量/分子量,你计算好需要的总体积然后根据浓度换算出需要的质量,即克数!
细胞培养阶段是用普通1640,也就是含糖11.1mmol/L的培养基,给不同糖浓度刺激时,换用无糖1640配置需要的糖浓度

INS-1细胞的培养条件是:Cell culturing: INS-1 cells were cultured to near confluence in RPMI-1640 medium with 11 mmol/l D-glucose supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), 100 U/ml penicillin, 100 ug/ml streptomycin, 10 mmol/l HEPES, 2 mmol/l L-glutamine, 1 mmol/l sodium pyruvate, and 50 umol/l b-mercaptoethanol. 可见对葡萄糖浓度的要求是常规RPMI-1640的GLU浓度,值得一提的是该细胞对2-ME(b-mercaptoethanol)巯基乙醇确实依赖的,如果不添加,细胞难以生长。

INS-1细胞是不难培养的,只是培养基成份多了一些,各位在配培养基的时候要多加小心。
一、细胞株说明
1. 细胞名称:大鼠胰岛素瘤细胞
2. 生长特性:贴壁生长
3. 培养条件:RPMI1640+0.11g/L L-Glutamine +0.11g/L 丙酮酸钠+5.6 MMOL/L 葡
萄糖+ 50umol/L 2 –mercaptoethanol + 10%FBS
4. 传代比例:1:3-1:6
5. 培养环境:37℃,5%CO2,95%O2

卖胰岛素细胞的ATCC

通过ATCC现能买到的胰岛细胞株有6种,你上面所提的INS-1就有。我就介绍一下该株的一些特性:
Asfari建立了INS-1、INS-2胰岛细胞系,其母系是RINm5f(来自于放射线诱导的胰岛素瘤)。RIN细胞与淋巴细胞共培养于含β-疏基乙醇的培养基,Asfari发现一些漂浮的细胞聚集成团,形态与RIN相异,分离及纯化这些细胞即得到INS,这些细胞的活力必须依赖于β-疏基乙醇的存在,其zui大的特点是其激素分泌与体内的胰岛细胞相似,具有葡萄糖刺激的胰岛素分泌。

一般而言,细胞株胰岛素分泌功能越强,转染效率越差,越容易受损、死亡;相反,若细胞株分化差,分泌胰岛素功能很差,转染效率可能越高,越不容易死亡。另外,若用脂质体转染时,浓度要低,否则可能死很多细胞;虽然效率可能低些,但是存活率高。

Hans E. Hohmeier , Christopher B. Newgard et al. Cell lines derived from pancreatic islets.Molecular and Cellular Endocrinology 2004,121–1.

葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)功能
另外,一位经验丰富的老师(diabetes等杂志发表过文章)提出忠告: 具有GSIS功能的胰岛细胞不容易稳定转染(非常困难) ,瞬时转染会容易些。

我养过三种胰岛B细胞系分别是RIN5F,INS-1,MIN6,前两者是大鼠胰岛B细胞系,MIN6是小鼠的, 其中养的是RIN5F,该细胞系一般用来做信号传导方面的研究. INS-1要复杂一些,据我所知,INS-1的GSIS功能不好,一般不能用来做功能试验,但是在另有一个INS-1E细胞系,具有一定的GSIS功能,高糖时insulin分泌量/低糖约为3-5倍, MIN6是其中GSIS功能的,但也是zui难养的,用它做实验是一种折磨,我是用原代的胰岛细胞来做GSIS功能试验的.
另外,在进行质粒转染时,胰岛素分泌功能越好的细胞转染愈难.用脂质体法是不可能转染上原代胰岛细胞的.

我知道华中科技大生物物理和化学研究所一是用元代细胞作转染;另外他们有ins-1胰岛β细胞株进行腺病毒转染,他们实验室的老板是徐涛教授;方法相对成熟。

HIT-15是错误写法, 应是HIT-T15, 中间多一个T, 另外该细胞系的GSIS的zui高倍数是2倍,这种细胞用于功能研究欠考虑.也不是*的功能检测β细胞系
目前大多用于机制及信号传导研究

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