简介

CCK8实验，全称Cell Counting Kit-8，是一种常用于细胞增殖和细胞毒性检测的比色法。该实验基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）的还原反应。在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liusuan二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下，WST-8被活细胞中线粒体中的脱氢酶还原形成橙黄色的甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比，通过测定在特定波长（通常是450nm）处的吸光度（OD值），可以间接计算活细胞的数量。

CCK8实验步骤

  1.细胞接种：将细胞接种到96孔板中，并在适宜条件下培养至适宜密度。

  2.药物处理：向含有细胞的孔中加入不同浓度的待测物质。

  3.孵育：将培养板在细胞培养箱中孵育适当时间，以便药物与细胞作用。

  4.添加CCK8：向每个孔中加入CCK8溶液，继续孵育一段时间（通常为1-4小时）。

  5.检测吸光度：使用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度值。

  6.数据分析：根据吸光度值计算细胞的相对生存分数或抑制率，并进行进一步分析。

注意事项

  1.实验中应避免使用含有强还原剂的培养基，以免影响CCK8的检测结果。

  2.实验前应绘制标准曲线以校准细胞数量与吸光度值之间的关系。

  3.孵育时间应根据实验具体情况调整，以确保OD值处于适宜范围内。

  4.实验操作应标准化，以保证结果的重复性和可比性。