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大豆制品中尿素酶活性的測定方法
方法一：酸度計法
1. 原理:根據(jù)AOCS法，測定出自于大豆及加工產(chǎn)品的尿素酶活化度。
2. 儀器
（1） 可調(diào)節(jié)溫度的恒溫水浴鍋
（2） pH計
（3） 50ml碘瓶
3. 試劑
（1） 磷酸二氫鉀
（2） 磷酸氫二鉀
（3） 尿素[CO（NH2）2]
（4） 甲苯
（5） 0.05M磷酸緩沖液：
磷酸二氫鉀3.403g 100ml水中
混合1000ml，調(diào)pH為7.0
磷酸氫二鉀4.335g 100ml水中
（6） 尿素緩沖液：取分析純尿素15g，溶于500ml磷酸緩沖液，再加5ml甲苯防腐劑（防止霉菌發(fā)酵），調(diào)pH 值為7.0
4. 步驟
0.8g樣品+40ml尿素緩沖液
試樣粉碎到0.35mm以下 搖勻后放入 0.8g樣品+40ml磷酸緩沖液
30℃ 恒溫水浴槽中，每5min搖勻一次，反應(yīng)30min，在5min內(nèi)測定pH值。
5. 計算：尿素酶活化度（pH值上升值）=試樣的pH測定值-空白的pH值
方法二 尿素酶快速測定法——酚紅法（參考法）
稱取0.2g經(jīng)磨細的豆粕樣品放置試管中，注入2%尿素1ml，開始計時，加入指示劑苯酚2滴，再加入8ml蒸餾水，（20-30s）開始震搖試管約10s，直至全脂豆粕浮在液體層，每搖動10s約等待3s，再觀察溶液層顏色，如果出現(xiàn)粉紅色，計下時間，與尿素酶活性表對照，如果顏色不變，則再搖10s約等待3s，然后再觀察溶液層顏色，重復(fù)操作，如一直不變，再重頭開始。（做實驗以前，要先做空白實驗，如果呈粉紅色則指示劑已經(jīng)不能用，重新配置指示劑。震搖停止后觀察溶液的顏色時要等3s，不可太快或太慢，否則會看錯，晚間不能做該實驗。
| 時間（min） | 豆粕尿素酶活性 |
| 0-1 | 0.9以上 |
| 1-2 | 0.9-0.7 |
| 2-3 | 0.7-0.5 |
| 3-3.5 | 0.5-0.4 |
| 3.5-4 | 0.4-0.3 |
| 4-4.5 | 0.3-0.25 |
| 4.5-5 | 0.25-0.2 |
| 5-6 | 0.2-0.15 |
| 6-7 | 0.15-0.1 |
| 7-9 | 0.1-0.05 |
| 12無色 | 0 |
方法三：尿素酶活性快速測定法——酚紅法（粗略法）
1. 原理：尿素酶 + 尿素 氨氣（用酚紅作指示劑）
2.試劑
（1） N氫氧化鈉：稱0.4g氫氧化鈉溶于100ml水中。
（2） 0.1N硫酸：將2.77ml濃硫酸加入1000ml水中稀釋。
（3） 尿素—酚紅溶液：
0.14g酚紅溶于35ml水中+7ml0.1N氫氧化鈉
混合 0.1N硫酸滴定 琥珀色
21g尿素溶于300ml水中
方法：將一匙粉碎過的黃豆粕放入小玻皿中，將已調(diào)好的尿素——酚紅溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至*錦濕，停留5min，觀察豆粕的紅色反應(yīng)。
| 少量紅點 | 微量活躍（△pH=0.05-0.10） |
| 約25%紅點 | 中度活躍（△pH=0.10-0.25） |
| 約50%紅點 | 活躍（△pH=0.30-0.50） |
| 約75%紅點 | 非?；钴S（△pH≧2.0） |
| 5min沒紅點出現(xiàn)，停留25min任無 | 豆粕過熟 |