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氣相色譜程序升溫法測定硝酸異山梨酯有機溶劑的殘留量
閱讀：1900 發(fā)布時間：2012-7-26
硝酸異山梨酯是有機硝酸酯類藥物，其制劑（片劑）臨床上用于冠心病、心絞痛的治療，是應用zui廣泛的心血管藥物之一。其合成過程中使用了氯仿、乙酸、乙酸乙酯等有機試劑，氯仿對人體有害，乙酸易引起制劑中主藥的分解，乙酸乙酯有不良氣味，故有必要對其殘留量進行控制，本文采用氣相色譜法同時測定硝酸異山梨酯原料中三種有機溶劑殘留量，方法靈敏、準確、可靠。
1 儀器與試劑
普瑞GC7800氣相色譜儀，硝酸異山梨酯（山東力諾制藥廠），氯仿、乙酸、乙酸乙酯和DMF均為分析純。
2 實驗部分
2.1 溶液的制備
2.1.1 標準溶液的制備：取氯仿、乙酸、乙酸乙酯適量，用DMF稀釋成每1ml含氯仿0.01mg，含乙酸乙酯0.1mg，搖勻，即得標準貯備液。取標準儲備液適量稀釋, 倍得對照品溶液。
2.1.2 供試品溶液的制備：取硝酸異山梨酯1g，精密稱定，置10ml容量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻即得供試品溶液。
2.2 色譜條件及含量計算方法
色譜柱為PEG-20M不銹鋼柱（4m×2mm），柱溫采用程序升溫，起始柱溫50℃維持3min，然后以10℃/min的速率升至180℃維持5min，再以10℃/min的速率升280℃維持10min。FID檢測器，檢測器溫度320℃，進樣口溫度320℃，氮氣為載氣，流速50ml/min，氫氣流速30ml/min，空氣流速400ml/min。理論塔板數(shù)以乙酸乙酯計不低于1600，對照品及供試品溶液分別進樣量2μl。外標峰面積法計算含量。
3 結果與討論
3.1 線性關系考察
精密量取標準貯備液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml至10ml量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻，即得到系列標準溶液Ⅰ-Ⅵ。進樣測定，以各溶液濃度（C）為橫坐標，相應峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，得氯仿和乙酸乙酯的線性方程分別為Y=38.01+3535X,（r=0.9994），Y=9.51+2926.76X,（r=0.9997），Y=-5.34478+1198.35821X,（r=0.9999）， 表明氯仿在0.0005～0.003mg/ml范圍內、乙酸和乙酸
乙酯濃度在0.005～0.03mg/ml范圍內線性關系良好。
3.2 精密度試驗
取對照品溶液1份，進樣5次，結果氯仿峰面積的RSD=2.6%，乙酸峰面積的RSD=3.6%，乙酸乙酯峰面積的RSD=3.9%。
3.3 回收率試驗
精密稱取同一批已知殘留量的硝酸異山梨酯樣品0.5g（3份），（含氯仿6.5×0.0001mg，含乙酸、乙酸乙酯各8.5×0.001mg，置10ml量瓶中，分別精密加入標準貯備液0.05ml，0.10ml， 0.15ml，再用DMF溶解，稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件進樣測定，計算回收率，氯仿、乙酸、乙酸乙酯回收率分別為：100.3%，98.7%和100.5%。
3.4 檢測限測定
逐步稀釋2.1.1中的標準溶液，按上述色譜條件進樣，氯仿、乙酸、乙酸乙酯的檢測限（N=3）分別為30mg，50mg 和100mg。
3.5 樣品測定
精密量取對照溶液和供試品溶液各2μl，按上述色譜條件進樣，按外標法以峰面積計算各樣品中有機殘留量，結果表明：三批樣品均符合人體用藥有機殘留標準之規(guī)定。
3.6 實驗條件的選擇
因氯仿為強極性物質，故選用強極性固定液的填充柱PEG-20M不銹鋼柱；由于氯仿、乙酸和乙酸乙酯的沸點有一定差距，恒溫分離時間長且峰形較差且易與溶劑重合，因此采用程序升溫模式；又因實驗要求較低的檢測限且均為含碳化合物故采用靈敏度較高的氫火焰檢測器。
1 儀器與試劑
普瑞GC7800氣相色譜儀，硝酸異山梨酯（山東力諾制藥廠），氯仿、乙酸、乙酸乙酯和DMF均為分析純。
2 實驗部分
2.1 溶液的制備
2.1.1 標準溶液的制備：取氯仿、乙酸、乙酸乙酯適量，用DMF稀釋成每1ml含氯仿0.01mg，含乙酸乙酯0.1mg，搖勻，即得標準貯備液。取標準儲備液適量稀釋, 倍得對照品溶液。
2.1.2 供試品溶液的制備：取硝酸異山梨酯1g，精密稱定，置10ml容量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻即得供試品溶液。
2.2 色譜條件及含量計算方法
色譜柱為PEG-20M不銹鋼柱（4m×2mm），柱溫采用程序升溫，起始柱溫50℃維持3min，然后以10℃/min的速率升至180℃維持5min，再以10℃/min的速率升280℃維持10min。FID檢測器，檢測器溫度320℃，進樣口溫度320℃，氮氣為載氣，流速50ml/min，氫氣流速30ml/min，空氣流速400ml/min。理論塔板數(shù)以乙酸乙酯計不低于1600，對照品及供試品溶液分別進樣量2μl。外標峰面積法計算含量。
3 結果與討論
3.1 線性關系考察
精密量取標準貯備液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml至10ml量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻，即得到系列標準溶液Ⅰ-Ⅵ。進樣測定，以各溶液濃度（C）為橫坐標，相應峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，得氯仿和乙酸乙酯的線性方程分別為Y=38.01+3535X,（r=0.9994），Y=9.51+2926.76X,（r=0.9997），Y=-5.34478+1198.35821X,（r=0.9999）， 表明氯仿在0.0005～0.003mg/ml范圍內、乙酸和乙酸
乙酯濃度在0.005～0.03mg/ml范圍內線性關系良好。
3.2 精密度試驗
取對照品溶液1份，進樣5次，結果氯仿峰面積的RSD=2.6%，乙酸峰面積的RSD=3.6%，乙酸乙酯峰面積的RSD=3.9%。
3.3 回收率試驗
精密稱取同一批已知殘留量的硝酸異山梨酯樣品0.5g（3份），（含氯仿6.5×0.0001mg，含乙酸、乙酸乙酯各8.5×0.001mg，置10ml量瓶中，分別精密加入標準貯備液0.05ml，0.10ml， 0.15ml，再用DMF溶解，稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件進樣測定，計算回收率，氯仿、乙酸、乙酸乙酯回收率分別為：100.3%，98.7%和100.5%。
3.4 檢測限測定
逐步稀釋2.1.1中的標準溶液，按上述色譜條件進樣，氯仿、乙酸、乙酸乙酯的檢測限（N=3）分別為30mg，50mg 和100mg。
3.5 樣品測定
精密量取對照溶液和供試品溶液各2μl，按上述色譜條件進樣，按外標法以峰面積計算各樣品中有機殘留量，結果表明：三批樣品均符合人體用藥有機殘留標準之規(guī)定。
3.6 實驗條件的選擇
因氯仿為強極性物質，故選用強極性固定液的填充柱PEG-20M不銹鋼柱；由于氯仿、乙酸和乙酸乙酯的沸點有一定差距，恒溫分離時間長且峰形較差且易與溶劑重合，因此采用程序升溫模式；又因實驗要求較低的檢測限且均為含碳化合物故采用靈敏度較高的氫火焰檢測器。