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在生物技術(shù)領(lǐng)域，離子交換色譜被廣泛應(yīng)用于電荷差異蛋白的分離，包括單克隆抗體（MAbs），其原理基于流動相梯度變化的離子強度對蛋白大分子的作用力的差異，而到達(dá)分離蛋白電荷異構(gòu)體的目的。MAbs作為生化藥物已經(jīng)在治療很多疾病的過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，尤其是在癌癥的治療方法，已經(jīng)商品化的MAbs藥物包括羅氏公司的帕妥珠單抗、諾華公司的依維莫司等等。

MAbs藥物的每個生產(chǎn)環(huán)節(jié)過程中，必須采用適合的方法進(jìn)行產(chǎn)品的純化和質(zhì)量控制，測定其效價、聚集體和電荷亞型變體。電荷亞型變體是在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的，這些副產(chǎn)物會產(chǎn)生與主產(chǎn)品不同的藥效，有時會引起嚴(yán)重的副作用。因此本文采用離子交換色譜的方法對MAbs進(jìn)行分離分析，同時考察了不同色譜條件對分離的影響。各分離模式下柱溫均為25 ℃，檢測波長214 nm和280 nm，流速為1.0 mL/min。

（1）離子交換色譜條件：色譜柱1：ProPac WCX-10，10 µm，4×250 mm， P/N：054993；色譜柱2：MAbPac SCX-10，10 µm，4×250 mm， P/N：074625；流動相：A：20 mmol/L MES，用NaOH調(diào)節(jié)pH=5.5； B：20 mmol/L MES，0.25 mol/L NaCl，用NaOH調(diào)節(jié)pH=5.5；進(jìn)樣量：10 µL梯度條件見表2-19：

（2）疏水作用力色譜條件：色譜柱：ProPac HIC-10，10 µm，4×250 mm， P/N：074197；流動相：A：0.02 mol/L 醋酸鈉，調(diào)節(jié)pH= 7.0， 2 mol/L (NH4)2SO4； B：0.02 mol/L 醋酸鈉，調(diào)節(jié)pH=7.0梯度條件見表2-20

分別采用離子交換色譜（圖2-27）和疏水作用力色譜（圖2-28）分析MAbs樣品，在IEC分離模式下，MAbs出現(xiàn)六個顯著的色譜峰，它們之間存在電荷差異，依據(jù)電荷的差異在流動相鹽梯度的條件下進(jìn)行分離，這些色譜峰為單抗的電荷變體，說明客戶提供的樣品變體含量較高；而在HIC分離模式下（圖2-28），出現(xiàn)一個色譜峰，主要原因是MAbs和固定相、流動相之間以疏水作用力大小進(jìn)行分離，而MAbs電荷的差異對其沒有影響，因此針對不同的分離目的，采用合適的分離模式是比較重要的。比較了MAbs在MabPac SCX-10和ProPac WCX-10兩根色譜柱上的分離結(jié)果，色譜柱規(guī)格一致（4×250 mm），粒徑均為10 µm，雖然樣品濃度有差異，整體色譜圖比較接近，因此在分離MAbs樣品時，MabPac SCX-10也是一款較合適的色譜柱。