氨基酸分子為手性分子，有左旋和右旋兩種光學(xué)異構(gòu)體，被稱為L型(左)和D型(右)兩種。照常理講，氨基酸化學(xué)反應(yīng)需要L型氨基酸和D型氨基酸等量搭配作用。但存在于地球上所有的生物體中，氨基酸都為左旋型。這種被戲稱為“左撇子地球”的偏差一直是一個謎題。
在古生物化石中，我們卻能發(fā)現(xiàn)D型氨基酸的存在。這是由于生物死亡后埋在地下，有機(jī)體在自然條件下也被水解為氨基酸保存在化石中，但氨基酸的左旋體結(jié)構(gòu)慢慢地會向右旋體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，而各種左旋體結(jié)構(gòu)的氨基酸都有自己的“半衰期”，考古學(xué)家就可以依據(jù)化石中氨基酸左旋體與右旋體的比例來確定化石的年代。
目前測定氨基酸通常使用氨基酸專用分析儀或液相色譜儀，而液相色譜法的廣泛適用性具有其優(yōu)勢性，但常規(guī)液相檢測氨基酸的分析中，需要進(jìn)行衍生化處理，由于氨基酸衍生產(chǎn)物衰減較快，而離線手動衍生操作至進(jìn)樣分析的時間和操作強(qiáng)度很難保證均一，常常導(dǎo)致結(jié)果不穩(wěn)定。
Vanquish Core
賽默飛全新的Vanquish Core 液相色譜儀，無需繁瑣的離線手動衍生化操作，只需2ul以內(nèi)的樣品，利用鄰苯二甲醛/ N-異丁?；?L-半胱氨酸 (OPA/IBLC)在線柱前衍生化，生成非對映異構(gòu)體衍生物（如圖1所示），無需成本較高的手性柱，即可完成L型和D型氨基酸異構(gòu)體的分離和測定。
圖1 衍生化過程
儀器配置：
• 系統(tǒng)底座：Vanquish System Base (VC-S01-A)
• 泵：Vanquish Binary Pump C(VC-P10-A-01)
• 自動進(jìn)樣器：Vanquish Split Sampler CT(VC-A12-A-02)
• 柱溫箱：Vanquish Column Compartment C(VC-C10-A-03)
• 檢測器：Vanquish Fluorescence Detector(VC-D50-A-01)
色譜條件：
• 色譜柱：Accucore XL C18（150mm×4.6 mm，4 μm，P/N：74104-154630）
• 流動相：A：50mM乙酸鈉水溶液（pH=6.0）；B：乙腈/甲醇/水=45:45:10，
流速：1.0 mL·min-1，梯度洗脫見表1
表1 梯度洗脫程序
• 進(jìn)樣量
混標(biāo)：0.5ul ( 注：在線衍生試劑需0.25 ul)
樣品：2.0ul ( 注：在線衍生試劑需2.2 ul)
• 柱 溫：30℃
• 檢測器：激發(fā)波長：230nm，發(fā)射波長：450nm，靈敏度：5，燈模式：標(biāo)準(zhǔn)
在線針內(nèi)衍生程序
和常規(guī)進(jìn)樣方式相比，在線針內(nèi)衍生方法需要使用Vanquish Core液相的用戶自定義進(jìn)樣程序功能（User Defined Program,UDP），氨基酸在線針內(nèi)衍生程序見圖2。
圖2 在線針內(nèi)衍生程序
Position R:A2, 硼酸緩沖液；Position R:A3, 衍生試劑；
Position R:A4, 稀釋液（點(diǎn)擊查看大圖）
表2 衍生劑信息
色譜圖：
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
本方法使用OPA/IBLC作為手性拆分衍生化試劑，利用全自動衍生功能的自動進(jìn)樣器進(jìn)行在線衍生，衍生后直接進(jìn)樣分析，完成了手性異構(gòu)體氨基酸的分離測定，消除了離線衍生進(jìn)樣時間不同和手工操作造成的誤差，不僅提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性，而且大大降低了成本和工作強(qiáng)度。
不止于此
Vanquish Core 液相色譜儀不僅可用于生命的探索，對于測定我們目前生活密切相關(guān)的食品、藥品以及化妝品中的氨基酸，Vanquish Core 液相色譜儀也不在話下。其可*《SN/T 5223— 2019 蜂蜜中18 種游離氨基酸的測定gao效液相色譜- 熒光檢測法》中在線自動衍生法測定氨基酸；而對于中草藥中的氨基酸，膠原蛋白、肽類等化妝品中的氨基酸，Vanquish Core液相色譜儀也均可滿足測定和研發(fā)的需求。另外，Vanquish Core液相色譜儀結(jié)合賽默飛du有的電霧式檢測（CAD）無需衍生化處理，可直接完成氨基酸的測定，省時省力更經(jīng)濟(jì)。
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