數(shù)據(jù)非依賴性采集(DIA)是隨著定量蛋白質組學而建立的質譜掃描技術。 DIA 能夠獲得掃描范圍 內所有母離子及二級子離子信息,不會造成低豐度離子信息的丟失,同時突破了高分辨質譜二級定量的通量 限制。 本研究基于靜電場軌道阱 Q鄄qIT鄄OT 三合一質譜,發(fā)展了經典 DIA 方法以及 WiSIM鄄DIA 和 Full MS鄄DIA 兩種全新 DIA 方法,并對 Hela 細胞全蛋白中添加的 10 條低濃度肽段進行定量分析,考察方法的線性、重現(xiàn)性 和靈敏度。 結果表明,3 種方法的定量限均低至 amol (14 ~ 435 amol),并展示出良好的線性和定性確證可靠 性。 其中,WiSIM鄄DIA 基于超高分辨一級監(jiān)測定量,與經典 DIA 優(yōu)勢互補;Full MS鄄DIA 的選擇窗口僅 3 amu, 能夠直接進行搜庫鑒定,實現(xiàn)了數(shù)據(jù)依賴性采集(DDA)和 DIA 的統(tǒng)一,擺脫了 DIA 依賴于 DDA 建立譜圖庫 的局限性。
儀器與試劑： Orbitrap Fusion 三合一質譜儀、EASY鄄nLC 1000 納流超液相色譜(Thermo Fisher Scientific)。 標 準肽段由生工生物(上海)股份有限公司合成;乙腈、甲酸( Thermo Fisher Scientific);其它試劑均購自 Sigma鄄Aldrich 公司。
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