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RP-HPLC-MS方法分析幾種蛋白的胰蛋白酶酶解多肽產(chǎn)物的條件優(yōu)化

閱讀:827      發(fā)布時(shí)間:2018-03-29
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引言 在生物體內(nèi),蛋白的翻譯后修飾過程是蛋白發(fā)揮各種不 同生化功能的基礎(chǔ),這些翻譯后修飾包括糖基化、氧化、 甲基化和磷酸化等。作為生物藥物的蛋白在生產(chǎn)、運(yùn)輸、 保存過程中會(huì)產(chǎn)生變體,從而影響到藥物的活性和穩(wěn)定 性。因此蛋白的肽譜經(jīng)常被用來(lái)研究蛋白的翻譯后修飾 過程以及蛋白變體的存在。同時(shí)也用于生物制藥行業(yè)蛋 白產(chǎn)品初級(jí)結(jié)構(gòu)的確認(rèn) [1-3] ,從而更好地控制生化藥品的 質(zhì)量和確保病人的用藥安全。 本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法,得到各種蛋白的肽 譜,比較幾款不同的反相色譜柱在分離蛋白酶解片斷時(shí) 的差異,同時(shí)借助質(zhì)譜,評(píng)價(jià)蛋白酶解產(chǎn)物 - 多肽在酸性 或者堿性流動(dòng)相條件下表現(xiàn)出分離性能的差異。

儀器配置 Thermo Ultimate 3000

系統(tǒng):泵:DGP-3600RS;自動(dòng)進(jìn)樣器: WPS-3000TRS;柱溫箱:TCC-3000RS;檢測(cè)器:DAD-3000RS

質(zhì)譜:TSQ Vantage

色譜軟件:Chromeleon 6.8

提供商

賽默飛色譜及質(zhì)譜

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