使用ThermoFisher Lumina熒光分光光度計測量生物發(fā)光共振能量轉移

分子之間的能量轉移大多是由輻射導致的。然而當不同熒光物質非?？拷鼤r（<10nm），會發(fā)生共振能量轉移（RET）。熒光共振能量轉移（FRET）是一種典型的 RET現象。
在 FRET 中，使用強光照射以激發(fā)供體能量，處于激發(fā)態(tài)的供體將一部分或全部能量轉移給受體，受體被激發(fā)。如果受體熒光量子產率為零，則發(fā)生能量轉移熒光熄滅；如果受體也是一種熒光發(fā)射體則呈現出受體的熒光。光照下很多熒光物質會逐漸失去其熒光特性，這種現象被稱為光漂白。為了提高靈敏度，近期生物發(fā)光共振能量轉移（BRET）得到了廣泛應用1。BRET使用生物發(fā)光物質代替了熒光供體。由于BRET不在需要直射光線以激發(fā)供體，不存在放射性的能量轉移，所以避免了對樣品的害。
熒光素酶是一種螢火蟲體內的生物發(fā)光酶，被廣泛用于 BRET研究2。本實驗中，選擇Luc8（海腎熒光素酶）作為供體，該物質由海腎（Renillareinformis）基因突變而來。Luc8 的生物
熒光峰值接近480nm。