在生命科学的微观世界里,乙?;庖簧衩氐幕奘喂蹋缤卦谙赴骺赝缰械?“化学密码",发挥着关键且多样的作用。
乙?;侵冈诿傅拇呋饔孟?,将乙?;–H?CO-)添加到蛋白质、组蛋白、非组蛋白或其他分子上的化学修饰过程。这一修饰看似简单,却能对分子的功能、定位、稳定性以及与其他分子的相互作用产生深远影响。
在蛋白质层面,乙?;梢缘鹘诘鞍字实幕钚?,改变其与其他分子的结合能力,从而影响信号传导通路。以组蛋白为例,组蛋白的乙?;刺肴旧实慕峁购突虮泶锩芮邢喙亍5弊榈鞍妆灰阴;保旧式峁贡涞酶铀缮?,使得转录因子更容易接近 DNA,进而促进基因的转录;反之,去乙?;蚧崾谷旧式峁菇裘埽种苹虮泶?。
除了对基因表达的调控,乙?;共斡胂赴?、细胞周期调控、DNA 损伤修复等多个生物学过程。在细胞代谢中,乙?;奘慰梢缘鹘诖幻傅幕钚?,影响细胞内的能量代谢平衡。
鉴于乙?;谏锕讨械闹匾?,准确检测乙?;胶臀坏阒凉刂匾?。以下是一种常用的乙?;觳夥桨福?/span>
样本准备:根据研究目的,收集合适的生物样本,如细胞、组织或体液。对于细胞样本,需要进行细胞裂解,释放出蛋白质。对于组织样本,则需要先进行匀浆处理,再提取蛋白质。在提取蛋白质过程中,要注意保持蛋白质的完整性和活性,可使用合适的蛋白酶抑制剂。
蛋白质分离:采用 SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)技术对提取的蛋白质进行分离。SDS-PAGE 可以根据蛋白质的分子量大小将其分离成不同的条带,便于后续的检测分析。
Western Blot 检测:将分离后的蛋白质转移到 PVDF(聚偏二氟乙烯)膜或 NC(硝酸纤维素)膜上。然后,使用特异性的乙酰化抗体与膜上的乙?;鞍字式蟹跤纬煽乖?- 抗体复合物。经过洗涤去除未结合的抗体后,再加入二抗(标记有荧光素或酶)与一抗结合。最后,通过显色或荧光检测来确定乙?;鞍字实拇嬖诤拖喽员泶锪?。
质谱分析:如果需要进一步确定乙?;坏?,可以采用质谱分析技术。首先,将蛋白质进行酶解,切成小的肽段。然后,对肽段进行分离和质谱分析。通过质谱图的解析,可以确定肽段中是否存在乙?;奘我约耙阴;木咛逦坏?。
WB result of Acetyllysine Rabbit mAb
Primary antibody: Acetyllysine Rabbit mAb at 1/500 dilution
Lane 1: untreated HeLa whole cell lysate 20 µg
Lane 2: HeLa treated with 500 ng/ml TSA for 4 hours whole cell lysate 20 µg
Secondary antibody: Goat Anti-rabbit IgG, (H+L), HRP conjugated at 1/10000 dilution
Predicted MW: Multiple
Observed MW: Multiple
乙?;魑锾迥谥匾幕奘畏绞?,其检测对于深入理解生命过程、揭示疾病机制以及开发新的治疗策略具有重要意义。通过上述精准的检测方案,我们能够更好地解读细胞内的 “乙酰化密码",为生命科学的研究和发展提供有力支持。
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