如何正確操作人彈力蛋白酶(FE)ELISA試劑盒，應(yīng)該注意哪些細(xì)節(jié)？

 如何正確操作人彈力蛋白酶(FE)ELISA試劑盒，應(yīng)該注意哪些細(xì)節(jié)？

人彈力蛋白酶(FE)ELISA試劑盒操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

120?mol/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150?l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150?l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60?mol/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150?l的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150?l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30?mol/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150?l的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150?l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15?mol/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150?l的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150?l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.5?mol/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150?l的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150?l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50?l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40?l，然后再加待測樣品10?l（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50?l，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50?l，再加入顯色劑B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50?l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

人彈力蛋白酶(FE)ELISA注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間

控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)

算時(shí)請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。