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磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)试剂盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)水平。用纯化的磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)，和HRP标记的磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)抗原，使它们竞争结合，，经过彻-底洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)的含量。 

试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶

8标准品S1

（960 ng/L）0.5ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶标准品S2

（480 ng/L）0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条标准品S3

（240 ng/L）0.5ml×1瓶

4显色剂A液6ml×1瓶标准品S4

（120ng/L ）0.5ml×1瓶

5显色剂B液6ml×1瓶标准品S5

（60ng/L）0.5ml×1瓶  

6终止液6ml×1/瓶9说明书1份

7样品稀释液6ml×1/瓶10封板膜2张

操作步骤

1.加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

7.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)试剂盒不同批号组分不得混用。