产品简介：

本产品是用于荧光探针检测的即用型 qPCR 试剂，可以对靶片段进行实时定量 PCR 分析（Quantitative PCR, qPCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、热启动 Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2 和稳定剂等所有 qPCR 所需要的成分，用户只需加入基因组 DNA 或 cDNA 模板、引物和探针即可进行探针法 qPCR 反应。

产品特点：

1.以 2×Mix 提供，用户只需准备模板、引物、探针和 ROX 染料（取决于 qPCR 仪器） 即可以进行探针法 qPCR 实验，非常方便快捷，降低了操作误差。

2.各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高、特异性强。灵敏度最高时可以达到 50 拷贝/反应（跟模板质量，引物设计等相关）。

3.既可用于TaqMan 探针 qPCR，也可用于分子信标探针 qPCR。

4.灵敏度和专一性比染料法 qPCR 更高。

5.含 UNG 防污染检测系统添加 UNG（Uracil N-Glycosylase，尿-嘧-啶-N-糖基化酶），可以有效防止因 PCR 产物污染造成的假阳性结果。

6.可用于基因表达分析、SNP 分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。

7.本产品反复冻融 20 次对扩增效果没有任何影响。

8.本产品足够 100 次 20 μL 体系的探针法 qPCR 反应。

9.2×探针法 qPCR MasterMix（含 UNG 酶）只能用于科研。

产品参数：

成分规格包装

2×探针法 qPCR Master Mix

（含UNG 酶）1 mL1.5 mL 本色盖

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存, 不冻融时保存期限为 24 个月。如果需要每天使用，可在 4℃放置三周。

自备试剂

DNA 模板、引物、超纯水。

使用方法：

1. 如果有 N 个样品并且做定量分析，最好设置 N+7 个反应，多出的 7 个中，6 个是做标准曲线的阳性对照，一个是阴性对照（NC）。在 N+7 个 PCR 管中，加入下列成分。如果是做定性分析，则 6 个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对照（PC），用户

自己需要根据下表进行适当修改（把 6 个标曲反应改成 1 个阳性对照反应）。

成分N 个样品管6 个标准

曲线管NC 管

2×探针法

qPCR MasterMix

各 10 μL

各 10 μL

10 μL

自备引物 1（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自备引物 2（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自备模板 DNA

基因组 DNA10-100 ng不加不加

或 cDNA1-10 ng不加不加

自备阳性对照模板（6 个梯度）

不加各 1 μL

（各加 1

个梯度）

不加

阴性对照模板（一般用水）不加不加1 μL

自备探针（0.5 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自备 50×自备

ROX I 或 ROX II 染料（见注）各 0.4 μL各 0.4 μL0.4 μL

补超纯水到20 μL20 μL20 μL

2.放入荧光 PCR 仪中进行扩增, 下表的扩增参数仅供参考，一定需要根据靶分子长度， 引物和探针的 Tm 值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法PCR：

如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以选择两步法 PCR：

3.数据处理

如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴， 绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值， 再推算出其浓度。

如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性。一般情况下，阴性对照 Ct 大于

或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于

30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。

附：

下列信息仅供参考，具体以 qPCR 仪器的使用手册为准。

1.不需要 ROX 的机型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、 Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型号的荧光 PCR 仪器不需要加 ROX 染料，但加入的话也不会影响整个 qPCR 分析。

2.需要使用 ROX I 的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、 Step One Plus。

3.需要使用 ROX II 的机型：ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ

Chromo4、Corbett RotorGene 3000。

选择我们的2×探针法 qPCR MasterMix（含 UNG 酶），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！