产品简介：

用Pfu DNA聚合酶等高保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物为平末端，直接克隆比较困难。本试剂盒提供了含克隆载体的平末端DNA片段克隆试剂，极大提高了其克隆效率。

产品特点：

1.基于T4 DNA连接酶的平末端克隆。

2.优化的连接体系，极大降低载体自连。

3.使用蓝白斑筛选，一般95%以上的白转化子都是带有DNA插入片段的重组子。

4.可用于克隆高保真DNA聚合酶如Pfu、Pwo、DeepVent等DNA聚合酶扩增得到的PCR产物；也可以用于克隆一些产生平末端的限制性内切酶如EcoRV和SmaI等酶酶切产生的DNA片段；还可用于克隆由粘端DNA用DNA聚合酶补平 后的得到的平末端DNA片段。

5.本产品足够20次的10?L体系的平末端克隆。

6.平末端克隆试剂盒只可用于科研。

产品参数：

成份规格包装

超纯水1 mL1.5 mL 蓝盖管

平末端克隆 B 载体20 次0.5 mL 黄盖管

10×平末端克隆缓冲液20 ?L0.5 mL 绿盖管

T4 DNA 连接酶，5U/ ?L

20 ?L0.5 mL 红盖管

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

平末端 DNA 片段、大肠杆菌感受态细胞。

使用方法：

1. 按下表设置连接反应体系。注意：首-次使用本产品时需要在平末端克隆 B 载体干粉管中加入 22 ?L 的超纯水，涡旋震荡 30 秒溶解，短暂离心后即可使用。没有用完的平末端克隆B 载体溶液需要放-20℃保存：

成份用量

纯化后的平末端 DNA 片段10 ng

10×平末端克隆缓冲液1 ?L

平末端克隆 B 载体溶液1 ?L

T4 DNA 连接酶，5U/ ?L

1 ?L

补超纯水到10 ?L

2. 37℃保温，60 分钟。

3. 连接产物可直接用于后续转化自备的大肠杆菌感受态细胞，37℃过夜培养。注意：本产品使用的 B 载体是 Amp 抗性，故需要涂盘在含 Amp 的LB 培养基上筛选重组子，同时还需要在 LB 培养基中加入终浓度是 40 ?g/m 的 LX-gal 和终浓度是 24 ?g/mL 的 IPTG，这样可以通过蓝白斑筛选来降低假阳性率到 5%以下。白斑是重组子，蓝斑是非重组子。

选择我们的平末端克隆试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！